罗布麻产黄酮悬浮细胞培养体系的建立

发布时间：2021-07-30 02:36

　　目的探讨建立产黄酮的罗布麻悬浮细胞培养体系。方法采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定样品中总黄酮含量。结果将新疆罗布麻无菌种子苗茎段和叶片分别接种于附加0.5mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA的MS、B5、IS、WPM培养基上,其愈伤组织诱导率均为100%,且来源于WPM培养基上叶片诱导的愈伤组织状态最佳,质地疏松、生长较快。利用叶片在WPM上诱导的愈伤组织制备悬浮种子液,并优化其接种量,发现生物量积累最大的接种量为30g/L。在此基础上,分析了一个生长周期内悬浮细胞的生长和黄酮累积量情况,发现悬浮细胞生长曲线和黄酮累积量类似"S"型,黄酮含量在培养的第21天达最大值,为30.69 mg/g（DW）,该含量显著低于大田收获期罗布麻叶片中的黄酮含量,却高于茎和根中的含量。结论获得了生长状态好、质地疏松适合悬浮培养的愈伤组织,并初步建立其悬浮培养体系,该研究为利用罗布麻悬浮细胞培养技术规模化商业生产黄酮等有用物质奠定基础。 

【文章来源】：时珍国医国药. 2020,31(04)北大核心CSCD

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

悬浮种子液的制备

将上述筛选出的愈伤组织转接至不含琼脂的WPM液体培养基中,通过不断过筛去除块状愈伤组织法,最终筛选出分散性好的细胞悬浮物(图1)。在此基础上,分析了10g/L、20g/L、30g/L、40g/L和50g/L等接种量对悬浮细胞活力和生长量的影响(图3)。研究发现,10g/L～30g/L接种量下的细胞活力在0.52左右,差异不显著;40g/L和50g/L接种两下的细胞活力在0.25左右,二者差异也不显著。接种对悬浮细胞的鲜重比和干重的影响趋势相同,均在30g/L时达最高值,分别为14.94 和12.40g/L。2.8.3 罗布麻悬浮细胞培养过程中细胞生长和黄酮的积累

在接种量优化的基础上,考察一个培养周期内罗布麻悬浮细胞生长和黄酮积累的变化(图4)。发现在一个培养周期内,罗布麻悬浮细胞活力呈先增加后降低趋势,在第9天达最高值0.93。悬浮细胞的干重在一个培养周期内呈现0～9d积累缓慢, 6～15d显著增加,而后15～24d干重积累基本维持在12.60g/L。悬浮细胞中的黄酮含量在一个培养周期内呈现先升高后降低趋势。其中,黄酮含量在培养的第21d达最大值,为30.69 mg/g(DW)。2.8.4 罗布麻悬浮细胞与成熟植株中黄酮含量的比较分析

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3310512