白藜芦醇通过SIRT1/NF-κB/CD40途径调控动脉粥样硬化免疫炎性反应的机制研究

发布时间：2021-08-06 19:44

　　目的白藜芦醇被证实具有延长寿命、抗氧化、抗衰老、抗炎症等心血管保护作用,但其抗炎机制尚未完全清楚,近年研究证实CD40与其配体CD40L相互作用在动脉粥样硬化炎症反应中扮演着非常重要的角色,本研究旨在通过细胞及动物实验,模拟人体动脉粥样硬化模型,研究CD40/CD40L信号轴对血管内皮炎性损伤和动脉粥样硬化的影响及机制,阐明白藜芦醇通过SIRT1激活,调控CD40/CD40L信号通路抑制血管炎症反应及抗动脉硬化的可能分子机制,发掘白藜芦醇重要的生物学意义和临床使用价值。方法:1.白藜芦醇对HUVECs增殖活力及炎症环境下释放的炎症因子、趋化因子和活性氧的影响,不同浓度TNF-α和白藜芦醇作用于HUVECs,观察细胞的增殖活力,ELISA法检测细胞上清液的炎症因子IL-6,趋化因子MCP-1的水平,流式细胞法检测活性氧的水平。2.观察SIRT1在白藜芦醇作用下HUVEC内的表达定位,细胞免疫荧光染色法检测在白藜芦醇、SIRT1小干扰RNA作用下SIRT1在TNF-α刺激的HUVECs内细胞质和细胞核内的表达定位。3.筛选白藜芦醇干预TNF-α刺激的HUVECs后的差异表达基因,检测SIR... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原代培养脐静脉内皮细胞的生长状态（100×）

图 1.1 原代培养脐静脉内皮细胞的生长状态（100×）注： A. 原代脐静脉内皮细胞 24 h 后贴壁。B. 原代脐静脉内皮细胞 48-72 h 后对数期生长。C. 原代脐静脉内皮细胞 120 h 后呈“铺路石”样改变。3.1.2 VIII 因子相关抗原免疫荧光鉴定在荧光显微镜下可见脐静脉内皮细胞的细胞质呈黄绿色荧光，核周尤其明显，包核清楚，细胞轮廓清晰（图 1.2）。

图 1.3 倒置显微镜下观察 VIII 因子相关抗原免疫组化鉴定 HUVECs（200 ×）注： 图示内皮细胞的细胞质内呈棕黄色沉淀。3.2 白藜芦醇对 TNF-α 诱导的 HUVECs 细胞增殖活力的影响。分别用 0.1，1，10，100 μg/L 的 TNF-α 干预 HUVECs 细胞 24 h，与空白对照的 HUVECs 相比，HUVECs 细胞增殖活力呈浓度依赖性降低。10 μg/L TNF-α 与100 μg/L TNF-α 降低细胞增殖活力分别为 12.5%（P < 0.05）和 20.6%（P < 0.01）。0.1 μg/L 和 1 μg/L TNF-α 对 HUVECs 的增殖活力无明显改变。因此，在后续实验中，我们选用 10 μg/LTNF-α 作为药物干预浓度。分别用 10，20，40，80 μmol/L 的白藜芦醇干预 HUVECs 细胞 4 h，与空白对照的 HUVECs 相比，80 μmol/L 的白藜芦醇可显著降低 HUVECs 的增殖活力 15.9%（P < 0.05）。10-40 μmol/L 的白藜芦醇对 HUVECs 的增殖活力无明显改变。我们选择 5，10，20 μmol/L 的白藜芦醇预处理 4 h 后，再用一定浓度 10 μg/L


本文编号：3326374