凉膈散通过上调miR-21抑制LPS所致急性肺损伤
发布时间：2021-08-16 00:04
研究背景急性肺损伤（ALI）是一种严重威胁人类生命的疾病,至今还无特殊有效的治疗方法。中药名方凉膈散（LGS）在临床上可用于治疗ALI,但是其潜在的药理机制并不十分明确。本文重点研究LGS抑制内毒素（LPS）所致ALI的作用机制。研究目的探讨LGS抑制LPS所致ALI的作用机制,为凉膈散的临床运用提供实验数据支持。方法与结果1、采用噻唑蓝法（MTT）评价LGS对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的细胞毒性作用。MTT实验的结果显示,50,100,200μg/ml的LGS基本没有细胞毒性（存活率>90%）。因此,选择该浓度的LGS用于后续实验研究。酶联免疫吸附法（ELISA）检测非毒剂量LGS对RAW264.7细胞的炎症模型中细胞炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和炎症相关因子ROS表达的影响。结果显示,LGS以剂量依赖性的方式显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的IL-6、TNF-α、IL-11β和炎症相关因子ROS的产生。综合运用蛋白印迹法（Western blotting）、免疫荧光及荧光素酶报告基因实验（Lucif...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的生物来源示意图（摘自：ｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．Ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／ｍｉｃｒｏＲＮＡ?）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＭｉｃｒｏＲＮＡ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ??５本文主要研究工作及意义??
相关因子ＲＯＳ的释放??我们首先研宄了凉膈散在ＲＡＷ２６４．７细胞中的细胞毒性。用不同浓度的凉??膈散处理细胞２４小时后，用ＭＴＴ法测定细胞活力。如图１－１Ａ所示，凉膈散??浓度为５０－２００?ｎｇ／ｍｌ时在ＲＡＷ２６４．７细胞中没有明显的细胞毒性（存活??率＞９０％）。因此，使用了这些浓度的凉膈散进行后续的实验。??ＬＰＳ可以刺激ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞中促炎细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｔ、ＩＬ－１（３及??炎症相关因子ＲＯＳ的产生，从而引起炎症。为了评估凉膈散的抗炎作用，我们??检测了给予凉膈散后ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７细胞上层清液中促炎因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、炎症相关因子ＲＯＳ的产生的浓度。结果表明，ＲＡＷ２６４．７细胞??被ＬＰＳ?（１?ｎｇ／ｍｌ）刺激后上清中的ＩＬ－６产生增加。然而，在给予凉膈散处理后，??促炎细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｃｕ?ＩＬ－１Ｐ及炎症相关因子ＲＯＳ得到了显著抑制，且??具有较好的浓度依赖性（图１－１Ｂ－Ｆ），这和我们先前的研宄是一致的［４４］。综上??所述，这些结果表明凉膈散对ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７细胞产生的炎症因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ及炎症相关因子ＲＯＳ的产生具有显著的抑制作用。??２２??
??分别使用ｍｉＲ－２１激动剂和抑制剂来上调或抑制ｍｉＲ－２１的表达（图２－２Ｂ和Ｃ）。??结果显示，ｍｉＲ－２１?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ抑制了?ＬＧＳ对ｍｉＲ－２１的上调（图２－２Ｄ）。??Ａ?ｃ??｜?平??Ａ??２?＾?ｌｏ－??ｆ?：１—［厂??ＬＧＳ?＋??ＬＰＳ?（１?Ｍｇ／ｍｌ）?－?＋?＋??Ｂ．ｌ?ｃ?§??％?１４０－１?Ｉ?１－５－，??Ｉｆ?１２〇－??｜?＇＾１?■?々?Ｈ??２－？ｔ?ｒ
【参考文献】：
期刊论文
[1]血必净联合凉膈散治疗创伤性急性呼吸窘迫综合征临床观察[J]. 苟占彪,普丽,刘野,郭树明,骆元斌,张参军. 西部中医药. 2017(11)
[2]肺部感染所致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中医病因病机特点及从肠论治理论探讨[J]. 童晓萍,王维亮,何德平. 新中医. 2016(08)
[3]凉膈散的临床运用及其衍生方浅析[J]. 周仕杰,杨宇. 湖南中医杂志. 2014(09)
[4]王今达应用凉膈散治疗急性呼吸窘迫综合征经验[J]. 张万祥,丁沛. 中医杂志. 2013(07)
[5]中药治疗急性肺损伤68例疗效观察[J]. 李瑞娥. 中外医疗. 2013(09)
[6]凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠肺水肿的保护作用[J]. 刘建新,余林中,王丽,陈育尧,林晓春. 中药药理与临床. 2012(03)
[7]加味凉膈散含药血清对脂多糖刺激小鼠血小板Toll样受体4表达及细胞因子释放的影响[J]. 王兵,曹书华,王勇强,胡才理,徐新女. 中国中西医结合杂志. 2012(05)
[8]乌司他汀对急性肺损伤患者外周血单核细胞mCD14、HLA-DR表达的影响[J]. 苑建房. 河北医药. 2012(07)
[9]“肺与大肠相表里”理论指导治疗ALI/ARDS的临床疗效报告[J]. 徐彩超,刘新桥,刘恩顺,苏景深. 天津中医药大学学报. 2011(03)
[10]连翘颗粒和煎剂体外抗菌作用的观察[J]. 林锦泉,邝枣园,黄少伟,罗海燕. 中外医疗. 2011(10)
博士论文
[1]凉膈散对内毒素型急性肺损伤肺组织水液转运的影响及机制研究[D]. 王国全.南方医科大学 2014
硕士论文
[1]凉膈散加味方治疗脓毒症急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的临床观察[D]. 刘明.河北医科大学 2014
[2]凉膈散汤剂HPLC-DAD指纹图谱及其主要成分抗炎作用初步研究[D]. 胡建兰.南方医科大学 2014
[3]机械通气辅以加味凉膈散治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症疗效观察[D]. 王艳丽.广州中医药大学 2009
[4]凉膈散解毒作用细胞信号转导调控机制的实验研究[D]. 林慧.第一军医大学 2004
本文编号：3345182
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的生物来源示意图（摘自：ｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．Ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／ｍｉｃｒｏＲＮＡ?）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＭｉｃｒｏＲＮＡ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ??５本文主要研究工作及意义??
相关因子ＲＯＳ的释放??我们首先研宄了凉膈散在ＲＡＷ２６４．７细胞中的细胞毒性。用不同浓度的凉??膈散处理细胞２４小时后，用ＭＴＴ法测定细胞活力。如图１－１Ａ所示，凉膈散??浓度为５０－２００?ｎｇ／ｍｌ时在ＲＡＷ２６４．７细胞中没有明显的细胞毒性（存活??率＞９０％）。因此，使用了这些浓度的凉膈散进行后续的实验。??ＬＰＳ可以刺激ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞中促炎细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｔ、ＩＬ－１（３及??炎症相关因子ＲＯＳ的产生，从而引起炎症。为了评估凉膈散的抗炎作用，我们??检测了给予凉膈散后ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７细胞上层清液中促炎因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、炎症相关因子ＲＯＳ的产生的浓度。结果表明，ＲＡＷ２６４．７细胞??被ＬＰＳ?（１?ｎｇ／ｍｌ）刺激后上清中的ＩＬ－６产生增加。然而，在给予凉膈散处理后，??促炎细胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｃｕ?ＩＬ－１Ｐ及炎症相关因子ＲＯＳ得到了显著抑制，且??具有较好的浓度依赖性（图１－１Ｂ－Ｆ），这和我们先前的研宄是一致的［４４］。综上??所述，这些结果表明凉膈散对ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７细胞产生的炎症因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ及炎症相关因子ＲＯＳ的产生具有显著的抑制作用。??２２??
??分别使用ｍｉＲ－２１激动剂和抑制剂来上调或抑制ｍｉＲ－２１的表达（图２－２Ｂ和Ｃ）。??结果显示，ｍｉＲ－２１?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ抑制了?ＬＧＳ对ｍｉＲ－２１的上调（图２－２Ｄ）。??Ａ?ｃ??｜?平??Ａ??２?＾?ｌｏ－??ｆ?：１—［厂??ＬＧＳ?＋??ＬＰＳ?（１?Ｍｇ／ｍｌ）?－?＋?＋??Ｂ．ｌ?ｃ?§??％?１４０－１?Ｉ?１－５－，??Ｉｆ?１２〇－??｜?＇＾１?■?々?Ｈ??２－？ｔ?ｒ
【参考文献】：
期刊论文
[1]血必净联合凉膈散治疗创伤性急性呼吸窘迫综合征临床观察[J]. 苟占彪,普丽,刘野,郭树明,骆元斌,张参军. 西部中医药. 2017(11)
[2]肺部感染所致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中医病因病机特点及从肠论治理论探讨[J]. 童晓萍,王维亮,何德平. 新中医. 2016(08)
[3]凉膈散的临床运用及其衍生方浅析[J]. 周仕杰,杨宇. 湖南中医杂志. 2014(09)
[4]王今达应用凉膈散治疗急性呼吸窘迫综合征经验[J]. 张万祥,丁沛. 中医杂志. 2013(07)
[5]中药治疗急性肺损伤68例疗效观察[J]. 李瑞娥. 中外医疗. 2013(09)
[6]凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠肺水肿的保护作用[J]. 刘建新,余林中,王丽,陈育尧,林晓春. 中药药理与临床. 2012(03)
[7]加味凉膈散含药血清对脂多糖刺激小鼠血小板Toll样受体4表达及细胞因子释放的影响[J]. 王兵,曹书华,王勇强,胡才理,徐新女. 中国中西医结合杂志. 2012(05)
[8]乌司他汀对急性肺损伤患者外周血单核细胞mCD14、HLA-DR表达的影响[J]. 苑建房. 河北医药. 2012(07)
[9]“肺与大肠相表里”理论指导治疗ALI/ARDS的临床疗效报告[J]. 徐彩超,刘新桥,刘恩顺,苏景深. 天津中医药大学学报. 2011(03)
[10]连翘颗粒和煎剂体外抗菌作用的观察[J]. 林锦泉,邝枣园,黄少伟,罗海燕. 中外医疗. 2011(10)
博士论文
[1]凉膈散对内毒素型急性肺损伤肺组织水液转运的影响及机制研究[D]. 王国全.南方医科大学 2014
硕士论文
[1]凉膈散加味方治疗脓毒症急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的临床观察[D]. 刘明.河北医科大学 2014
[2]凉膈散汤剂HPLC-DAD指纹图谱及其主要成分抗炎作用初步研究[D]. 胡建兰.南方医科大学 2014
[3]机械通气辅以加味凉膈散治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症疗效观察[D]. 王艳丽.广州中医药大学 2009
[4]凉膈散解毒作用细胞信号转导调控机制的实验研究[D]. 林慧.第一军医大学 2004
本文编号：3345182
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