穿心莲内酯对急性淋巴细胞白血病细胞的生长抑制及凋亡诱导作用
发布时间：2021-08-27 06:01
目的:研究穿心莲内酯（andrographolide,AND）对急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）细胞生长和凋亡的影响。方法:人ALL细胞株CEM-C1经AND处理12 h、24 h和48 h,应用CCK-8法检测AND对细胞活力的影响;应用Wright-Giemsa染色法观察AND处理24 h对CEM-C1细胞形态及数量的影响;应用流式细胞术+annexin V-FITC/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞凋亡的作用;采用流式细胞术+PI染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞周期分布的作用;用Western blot法检测AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响;应用JC-1线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）检测试剂盒检测AND作用24 h对CEM-C1细胞MMP的影响。最后将CEM-C1细胞接种于BALB/c-nu雌性裸鼠右胁腹侧建立裸鼠ALL移植瘤模型,通过检测肿瘤体积及重量观察AND的体内抗ALL...
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2020,36(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
AND对ALL细胞移植瘤模型的体内生长抑制作用
图3 AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响为验证AND诱导CEM-C1细胞凋亡的效应，我们应用Western blot法检测应用AND后CEM-C1细胞凋亡相关蛋白的情况。作为caspase家族的关键因子，caspase-3和caspase-7是凋亡被诱导的过程中最主要的效应凋亡蛋白酶，其活化可诱导细胞发生凋亡[14];cleaved caspase-3和cleaved caspase-7分别是caspase-3和caspase-7活化过程中经剪切产生的活性片段，其活化程度及其与caspase-3和caspase-7的比值越高，细胞凋亡越明显[15-16]。在本研究中，AND剂量依赖性地升高caspase-3、caspase-7、cleaved cas?pase-3、cleaved caspase-7、cleaved caspase-3/caspase-3和cleaved caspase-7/caspase-7的水平。在此基础上，我们进一步观察AND对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的调控作用。Bcl-2蛋白通过抑制促细胞凋亡家族成员Bax的激活来阻止细胞凋亡[17]。而作为预测抗肿瘤药物临床疗效的指标之一，Bax/Bcl-2的比值与肿瘤缓解率成正比[18]。本研究表明，AND下调CEM-C1细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，上调促凋亡蛋白Bax的表达，提高Bax/Bcl-2的比值，从而抑制ALL细胞生长。
AND处理细胞24 h后，流式细胞术检测结果证明，随着药物浓度的增加，处于第2、4象限的细胞数增多，即凋亡细胞数量增多；对3次实验结果进行定量分析，结果显示，8μmol/L AND处理24 h后，CEM-C1细胞的凋亡率与空白对照组相比显著升高（P<0.05），见图2A。AND处理24 h后，随着药物AND浓度增大，停留在G2期的细胞增加，证明细胞周期被阻滞在G2期，细胞的生长被抑制，见图2B。3 AND对凋亡相关蛋白的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]沉默FoxM1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导口腔鳞癌细胞凋亡[J]. 王晓庚,刘林,左健,张非煜,李若萱. 中国病理生理杂志. 2019(03)
[2]RASA1在胰腺癌中的异常表达及其临床意义[J]. 秦玉璇,李东风,张世能,段伊帆,谢子钧,李子俊. 中国病理生理杂志. 2012(06)
本文编号：3365799
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2020,36(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
AND对ALL细胞移植瘤模型的体内生长抑制作用
图3 AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响为验证AND诱导CEM-C1细胞凋亡的效应，我们应用Western blot法检测应用AND后CEM-C1细胞凋亡相关蛋白的情况。作为caspase家族的关键因子，caspase-3和caspase-7是凋亡被诱导的过程中最主要的效应凋亡蛋白酶，其活化可诱导细胞发生凋亡[14];cleaved caspase-3和cleaved caspase-7分别是caspase-3和caspase-7活化过程中经剪切产生的活性片段，其活化程度及其与caspase-3和caspase-7的比值越高，细胞凋亡越明显[15-16]。在本研究中，AND剂量依赖性地升高caspase-3、caspase-7、cleaved cas?pase-3、cleaved caspase-7、cleaved caspase-3/caspase-3和cleaved caspase-7/caspase-7的水平。在此基础上，我们进一步观察AND对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的调控作用。Bcl-2蛋白通过抑制促细胞凋亡家族成员Bax的激活来阻止细胞凋亡[17]。而作为预测抗肿瘤药物临床疗效的指标之一，Bax/Bcl-2的比值与肿瘤缓解率成正比[18]。本研究表明，AND下调CEM-C1细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，上调促凋亡蛋白Bax的表达，提高Bax/Bcl-2的比值，从而抑制ALL细胞生长。
AND处理细胞24 h后，流式细胞术检测结果证明，随着药物浓度的增加，处于第2、4象限的细胞数增多，即凋亡细胞数量增多；对3次实验结果进行定量分析，结果显示，8μmol/L AND处理24 h后，CEM-C1细胞的凋亡率与空白对照组相比显著升高（P<0.05），见图2A。AND处理24 h后，随着药物AND浓度增大，停留在G2期的细胞增加，证明细胞周期被阻滞在G2期，细胞的生长被抑制，见图2B。3 AND对凋亡相关蛋白的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]沉默FoxM1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导口腔鳞癌细胞凋亡[J]. 王晓庚,刘林,左健,张非煜,李若萱. 中国病理生理杂志. 2019(03)
[2]RASA1在胰腺癌中的异常表达及其临床意义[J]. 秦玉璇,李东风,张世能,段伊帆,谢子钧,李子俊. 中国病理生理杂志. 2012(06)
本文编号：3365799
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