酶法分离和转化人参皂苷Rb2、Rb3和Rc的研究
发布时间：2021-08-27 06:24
人参皂苷是人参的主要活性成分,广泛分布于植物的根、茎、叶、花和果实中,具有抗炎、抗肿瘤、抗疲劳和增强免疫等多种药理活性。人参皂苷中糖链部分的组成与其药理活性密切相关,改变糖链的组成能改变皂苷的药理活性,因此制备一系列糖链组成不同的人参皂苷单体,对阐明人参皂苷药理活性的构效关系具有重要意义,同时为药物开发提供更多的化合物资源。目前已鉴定出200余种人参皂苷,但大部分仍难以大量获得,限制了其临床应用和工业化生产。其中,人参皂苷Rb2、Rb3和Rc由于极性相近,直接从人参总皂苷中分离难度大、收率低。本文利用多种特异性糖苷酶将与待分离皂苷相似的皂苷转化成极性相差较大的稀有皂苷,再经过硅胶层析柱分离制备出Rb2、Rb3和Rc三种单体皂苷,并分别以Rb2、Rb3和Rc为底物,酶法转化制备出一系列稀有人参皂苷。本论文的主要研究结果如下:制备了能分别水解人参皂苷C-20位外侧葡萄糖、吡喃型阿拉伯糖和呋喃型阿拉伯糖的糖苷酶Ccbgl3B、Bgp2和CS-abf,以及水解C-20内侧葡萄糖的糖苷酶Bglpc28。以富含人参皂苷Rb2的原人参二醇型总皂苷为底物,利用糖苷酶Ccbgl3B、CS-abf和Bgl...
【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人参皂苷结构图
图 2-1 TLC 检测硅胶柱分离产物 管-350 管收集产物 12:人参皂苷 Rb2 标准品 13：人参皂苷 Rb3 标准皂苷 Rc 标准品糖苷酶的制备和酶活测定转化人参皂苷的重要工具，因此尝试建立酶法对人参皂苷 Rb2。Ccbgl3B 是实验室构建的重组糖苷酶，它具有专一性水解人参葡萄糖的功能。Bgp2 是根据文献报道合成的重组糖苷酶，它 C-20 位外侧吡喃型阿拉伯糖的功能。CS-abf 是根据文献合成水解人参皂苷 C-20 位外侧的呋喃型阿拉伯糖。Bglpc28 是实苷酶，它是内切葡萄糖苷酶，它能够水解 C-20 位内侧的葡萄糖糖苷酶的制备 的方法，制备四种重组糖苷酶的粗酶液，五种糖苷水解酶在实现可溶性表达，纯化后均为单一条带且大小与文献中相符四种糖苷酶的酶学性质进行了表征。四种糖苷酶转化单体皂苷
图 2-2 TLC 检测四种糖苷酶转化人参皂苷1：Rb1、Rd 标准品 2：Rc 标准品 3：Rb1 底物 4：Rb1 转化产物 5：Rb2 底物 6：Rb2 转化产物 7：Rc 底物 8：Rc 转化产物 9：Rb3 底物 10：Rb3 转化产物 11：Rd 底物 12：Rd 转化产物13：Rb2 标准品 14：Rb3、Rg3 标准品(2)糖苷酶的蛋白浓度和酶活测定根据表 2-2 中方法绘制蛋白浓度标准曲线，结果如图 2-3。根据表 2-3 中方法绘制pNP 标准曲线，结果如图 2-4。四种糖苷酶的蛋白浓度和酶活力如表 2-6。
【参考文献】：
期刊论文
[1]α-半乳糖苷酶及其在饲料中的应用[J]. 陈国参,王佰涛,徐文涛,王一雯,李寒冰,刘德海. 中国饲料. 2019(07)
[2]酶转化制备人参皂苷Rg2及其对巨噬细胞增殖分化的影响[J]. 孙爱华,王宇,孙秀艳,袁小林,鱼红闪. 大连工业大学学报. 2019(02)
[3]AB-8型大孔吸附树脂纯化左金丸有效部位的工艺优选[J]. 李鹤,龚来觐,曾作财. 中医药临床杂志. 2019(02)
[4]人参皂苷抗炎作用及其分子机制的研究进展[J]. 刘博,俞婷,韩晓蕾,赵春媛,刘芳,陈乃宏. 中国药学杂志. 2019(04)
[5]大孔吸附树脂对生物碱分离研究概述[J]. 孙涛,杨晋. 化工装备技术. 2019(01)
[6]HPLC法同时测定9个不同产区人参花中5种皂苷含量[J]. 蔡芷辰,周艳丽,李振麟,钱士辉. 中医药导报. 2019(02)
[7]六种人参皂苷的制备及体外抗氧化活性研究[J]. 张馨妍,洪新悦,高连丛,马莹慧,韩柳. 世界最新医学信息文摘. 2018(A2)
[8]β-木糖苷酶的研究进展[J]. 汤勇,蔡俊. 中国酿造. 2018(10)
[9]硅胶柱层析分离天然产物实验要点分析[J]. 刘延杰,陈弯弯,向碧云,朱旭东,郝晓冉. 生物学通报. 2018(06)
[10]有机溶剂萃取法提取挥发油研究进展[J]. 吴启康,田晓静,高丹丹,陈士恩,李明生. 农产品加工. 2018(10)
博士论文
[1]稀有人参皂苷的制备方法及其抗过敏活性研究[D]. 刘迎.吉林大学 2018
[2]酶转化法制备高活性人参稀有皂苷及低聚丹酚酸的研究[D]. 刘春莹.吉林大学 2016
硕士论文
[1]人参皂苷Rh2调控白血病细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的机制研究[D]. 陈益.重庆医科大学 2018
[2]微生物转化人参皂苷Re制备Rh1[D]. 明有山.辽宁科技大学 2017
[3]人参茎叶中提取分离人参皂苷等有效成分研究[D]. 雷磊.西北大学 2016
[4]生物转化法制备人参皂苷F1及Rh1的研究[D]. 王宇.大连工业大学 2015
[5]人参饮品类食品加工过程中人参皂苷的变化规律研究[D]. 陈振.吉林农业大学 2014
[6]人参各主要成分对机体作用的比较研究[D]. 贾执瑛.上海交通大学 2013
[7]人参皂苷的结构修饰及生物活性的研究[D]. 李微.吉林大学 2010
本文编号：3365836
【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人参皂苷结构图
图 2-1 TLC 检测硅胶柱分离产物 管-350 管收集产物 12:人参皂苷 Rb2 标准品 13：人参皂苷 Rb3 标准皂苷 Rc 标准品糖苷酶的制备和酶活测定转化人参皂苷的重要工具，因此尝试建立酶法对人参皂苷 Rb2。Ccbgl3B 是实验室构建的重组糖苷酶，它具有专一性水解人参葡萄糖的功能。Bgp2 是根据文献报道合成的重组糖苷酶，它 C-20 位外侧吡喃型阿拉伯糖的功能。CS-abf 是根据文献合成水解人参皂苷 C-20 位外侧的呋喃型阿拉伯糖。Bglpc28 是实苷酶，它是内切葡萄糖苷酶，它能够水解 C-20 位内侧的葡萄糖糖苷酶的制备 的方法，制备四种重组糖苷酶的粗酶液，五种糖苷水解酶在实现可溶性表达，纯化后均为单一条带且大小与文献中相符四种糖苷酶的酶学性质进行了表征。四种糖苷酶转化单体皂苷
图 2-2 TLC 检测四种糖苷酶转化人参皂苷1：Rb1、Rd 标准品 2：Rc 标准品 3：Rb1 底物 4：Rb1 转化产物 5：Rb2 底物 6：Rb2 转化产物 7：Rc 底物 8：Rc 转化产物 9：Rb3 底物 10：Rb3 转化产物 11：Rd 底物 12：Rd 转化产物13：Rb2 标准品 14：Rb3、Rg3 标准品(2)糖苷酶的蛋白浓度和酶活测定根据表 2-2 中方法绘制蛋白浓度标准曲线，结果如图 2-3。根据表 2-3 中方法绘制pNP 标准曲线，结果如图 2-4。四种糖苷酶的蛋白浓度和酶活力如表 2-6。
【参考文献】：
期刊论文
[1]α-半乳糖苷酶及其在饲料中的应用[J]. 陈国参,王佰涛,徐文涛,王一雯,李寒冰,刘德海. 中国饲料. 2019(07)
[2]酶转化制备人参皂苷Rg2及其对巨噬细胞增殖分化的影响[J]. 孙爱华,王宇,孙秀艳,袁小林,鱼红闪. 大连工业大学学报. 2019(02)
[3]AB-8型大孔吸附树脂纯化左金丸有效部位的工艺优选[J]. 李鹤,龚来觐,曾作财. 中医药临床杂志. 2019(02)
[4]人参皂苷抗炎作用及其分子机制的研究进展[J]. 刘博,俞婷,韩晓蕾,赵春媛,刘芳,陈乃宏. 中国药学杂志. 2019(04)
[5]大孔吸附树脂对生物碱分离研究概述[J]. 孙涛,杨晋. 化工装备技术. 2019(01)
[6]HPLC法同时测定9个不同产区人参花中5种皂苷含量[J]. 蔡芷辰,周艳丽,李振麟,钱士辉. 中医药导报. 2019(02)
[7]六种人参皂苷的制备及体外抗氧化活性研究[J]. 张馨妍,洪新悦,高连丛,马莹慧,韩柳. 世界最新医学信息文摘. 2018(A2)
[8]β-木糖苷酶的研究进展[J]. 汤勇,蔡俊. 中国酿造. 2018(10)
[9]硅胶柱层析分离天然产物实验要点分析[J]. 刘延杰,陈弯弯,向碧云,朱旭东,郝晓冉. 生物学通报. 2018(06)
[10]有机溶剂萃取法提取挥发油研究进展[J]. 吴启康,田晓静,高丹丹,陈士恩,李明生. 农产品加工. 2018(10)
博士论文
[1]稀有人参皂苷的制备方法及其抗过敏活性研究[D]. 刘迎.吉林大学 2018
[2]酶转化法制备高活性人参稀有皂苷及低聚丹酚酸的研究[D]. 刘春莹.吉林大学 2016
硕士论文
[1]人参皂苷Rh2调控白血病细胞凋亡及组蛋白乙酰化修饰的机制研究[D]. 陈益.重庆医科大学 2018
[2]微生物转化人参皂苷Re制备Rh1[D]. 明有山.辽宁科技大学 2017
[3]人参茎叶中提取分离人参皂苷等有效成分研究[D]. 雷磊.西北大学 2016
[4]生物转化法制备人参皂苷F1及Rh1的研究[D]. 王宇.大连工业大学 2015
[5]人参饮品类食品加工过程中人参皂苷的变化规律研究[D]. 陈振.吉林农业大学 2014
[6]人参各主要成分对机体作用的比较研究[D]. 贾执瑛.上海交通大学 2013
[7]人参皂苷的结构修饰及生物活性的研究[D]. 李微.吉林大学 2010
本文编号：3365836
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