川芎挥发油保护血管内皮细胞有效成分筛选及藁本内酯的作用机制研究
发布时间：2021-08-27 17:26
目的:筛选川芎挥发油中具有保护血管内皮细胞作用的有效成分,并探讨其有效成分藁本内酯（LIG）对血管内皮细胞保护作用的机制。方法:建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）糖氧剥夺-再灌注（OGD-R）损伤模型。采用MTT法筛选川芎挥发油中对HUVEC OGD-R损伤具有保护作用的有效成分;通过高内涵（HCS）、蛋白印迹（Western Blot）等手段,探讨LIG对OGD-R损伤HUVEC中PI3K-Akt信号通路的影响;复制斑马鱼血管新生障碍模型观察LIG对血管新生的影响。1.川芎挥发油保护血管内皮细胞有效成分筛选采用含有Na2S2O4的无糖培养基培养12h模拟糖氧剥夺状态,再正常培养4h模拟再灌注状态,建立HUVEC OGD-R损伤模型;分别给予不同浓度的川芎挥发油、LIG、丁基苯酞（BP）、洋川芎内酯A/I、欧当归内酯A、川芎嗪（TMP）、阿魏酸,预给药1 h,采用MTT法测定不同药物对模型细胞活力的影响。选择具有保护作用的LIG和BP,以20、40、60μM对HUVEC OGD-R损伤模型预给药,检测细胞内MDA、SOD...
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PI3K-Akt通路及本研究中涉及的相关因子之间的关系
15图 1-1 川芎挥发油的 GC-MS 图谱表 1-1 川芎挥发油化学成分鉴定结果编号NO出峰时间/分钟Retainedtime/min化合物名称Compound name分子式Formula相对含量/ %Relative content/ %1 3.375 二甲基亚砜 Dimethyl sulfoxide C2H6OS 10.332 5.357 (1R)-(+)-α蒎烯 (1R)-(+)-α-pinene C10H160.413 6.399 桧烯 Sabinene C10H161.28
图 2-1 各组 RNA 凝胶电泳图右分别为 1.溶剂对照组，2.模型组，3.LIG60μM 组，4.LIG40μM 组，5. LT-PCR 检测 mRNA 表达验前，进行温度梯度筛选，并进行扩增效率检测。温度法反应程序，以 20 μl 为反应体系，延伸时间 30 s，温度扩增曲线及熔解曲线为参考，以确定恰当的扩增温度样品以 5 倍稀释为不同浓度，共 5 个组，采用相同的反系进行检测，计算 PCR 扩增效率，效率在 90 %-110 %式实验采用试剂盒两步法反应程序，以 20μl 为反应体NA 的 Ct 值。以β-Actin 为内参，采用ΔΔCt 法计算 VEGRNA 的相对表达水平。每个实验组重复 3 次。PCR 扩曲线、熔解曲线及熔解峰见图 2-2，引物序列如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Regulation of Wnt/β-catenin signaling by herpesviruses[J]. Kevin J Zwezdaryk,Joseph A Combs,Cindy A Morris,Deborah E Sullivan. World Journal of Virology. 2016(04)
[2]实用血瘀证诊断标准[J]. 中国中西医结合学会活血化瘀专业委员会,陈可冀,徐浩,罗静,邱禹,王安璐,史大卓,刘玥,尚青华. 中国中西医结合杂志. 2016(10)
[3]川芎水提物对缺氧内皮细胞的保护作用[J]. 李喆,焦艳,王磊,刘娜,赵兴华. 中医学报. 2016(10)
[4]基于Act1/NF-κB信号通路探讨类风湿关节炎患者血瘀状态的机制及新风胶囊对其影响[J]. 章平衡,刘健,谈冰,万磊. 中国中西医结合杂志. 2016(08)
[5]补肾活血方对老年高血压肝肾亏虚兼血瘀证患者血管内皮功能的影响[J]. 盛涵恩,王红玲. 河南中医. 2016(08)
[6]川芎的活性成分及其心血管系统保护作用研究进展[J]. 朱尧,刘溦溦,顾宁,史爱武. 时珍国医国药. 2016(07)
[7]血管内皮细胞miRNAs与高血压病血瘀证的相关性研究进展[J]. 黄守清,许艺惠,尹莲花. 医学综述. 2016(11)
[8]桃红四物汤对产后血瘀大鼠血清NO、子宫组织VEGF的表达及对PI3K/Akt信号通路的影响[J]. 韩岚,梁杰,张艳艳,季兆洁,李珊珊,郭栋栋,吴欢茹,彭代银. 中华中医药杂志. 2016(05)
[9]益气活血方对糖尿病大鼠p38MAPK通路的影响[J]. 鲍陶陶,杨晓春,储全根,黄菊. 中国实验方剂学杂志. 2016(08)
[10]洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究[J]. 林红. 北方药学. 2016(04)
博士论文
[1]饱餐与饥饿对小鼠动脉粥样硬化形成及心肌能量代谢的影响及机制研究[D]. 程文.山东大学 2016
[2]急性冠脉综合征介入前后中医证候要素演变规律及益气活血中药作用机制研究[D]. 张大武.中国中医科学院 2010
[3]基于HUVECM和色谱质谱联用的药物筛选模型的建立及其应用[D]. 岳宣峰.陕西师范大学 2009
[4]龙牙楤木总苷对大鼠心肌缺血再灌注相关粘附分子表达的影响[D]. 李明.北京中医药大学 2009
[5]老龄大鼠脑缺血/再灌注细胞凋亡及相关基因表达和脑脉通对其影响[D]. 任小巧.北京中医药大学 2003
[6]川芎挥发油解热作用及其部分机理探讨[D]. 杨金蓉.成都中医药大学 2002
[7]奶芎、山川芎与川芎的品质比较研究[D]. 刘圆.成都中医药大学 2002
硕士论文
[1]蒸馏—萃取耦合法提取川芎挥发油工艺研究及其质量评价[D]. 胡春兰.承德医学院 2015
[2]藁本内酯对猪冠状动脉舒张作用机理探讨及药效学研究[D]. 李玲.兰州大学 2014
[3]川芎挥发油软胶囊中试放大及药理毒理研究[D]. 张丽娟.第二军医大学 2014
[4]丹参酮ⅡA对血管内皮损伤的类雌激素样保护效应及机制研究[D]. 刘欣.北京中医药大学 2013
[5]川芎挥发油对皮肤瘢痕增生的治疗作用及其安全性评价[D]. 冉霞.华东师范大学 2012
[6]复方地龙胶囊对气虚血瘀证大鼠基础指标及血管内皮损伤研究[D]. 窦倩.天津医科大学 2012
[7]川芎油软胶囊治疗偏头痛急性发作期（血瘀证）即刻止痛作用的临床研究[D]. 李斌.成都中医药大学 2012
[8]基于数据挖掘的川芎挥发油有效成分辨识研究[D]. 陈畅.西南交通大学 2009
[9]川芎油软胶囊治疗偏头痛（血瘀证）的临床观察[D]. 崔占举.成都中医药大学 2009
[10]川芎油软胶囊治疗偏头痛的临床观察及疗效分析[D]. 葛鑫宇.南方医科大学 2009
本文编号：3366781
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PI3K-Akt通路及本研究中涉及的相关因子之间的关系
15图 1-1 川芎挥发油的 GC-MS 图谱表 1-1 川芎挥发油化学成分鉴定结果编号NO出峰时间/分钟Retainedtime/min化合物名称Compound name分子式Formula相对含量/ %Relative content/ %1 3.375 二甲基亚砜 Dimethyl sulfoxide C2H6OS 10.332 5.357 (1R)-(+)-α蒎烯 (1R)-(+)-α-pinene C10H160.413 6.399 桧烯 Sabinene C10H161.28
图 2-1 各组 RNA 凝胶电泳图右分别为 1.溶剂对照组，2.模型组，3.LIG60μM 组，4.LIG40μM 组，5. LT-PCR 检测 mRNA 表达验前，进行温度梯度筛选，并进行扩增效率检测。温度法反应程序，以 20 μl 为反应体系，延伸时间 30 s，温度扩增曲线及熔解曲线为参考，以确定恰当的扩增温度样品以 5 倍稀释为不同浓度，共 5 个组，采用相同的反系进行检测，计算 PCR 扩增效率，效率在 90 %-110 %式实验采用试剂盒两步法反应程序，以 20μl 为反应体NA 的 Ct 值。以β-Actin 为内参，采用ΔΔCt 法计算 VEGRNA 的相对表达水平。每个实验组重复 3 次。PCR 扩曲线、熔解曲线及熔解峰见图 2-2，引物序列如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Regulation of Wnt/β-catenin signaling by herpesviruses[J]. Kevin J Zwezdaryk,Joseph A Combs,Cindy A Morris,Deborah E Sullivan. World Journal of Virology. 2016(04)
[2]实用血瘀证诊断标准[J]. 中国中西医结合学会活血化瘀专业委员会,陈可冀,徐浩,罗静,邱禹,王安璐,史大卓,刘玥,尚青华. 中国中西医结合杂志. 2016(10)
[3]川芎水提物对缺氧内皮细胞的保护作用[J]. 李喆,焦艳,王磊,刘娜,赵兴华. 中医学报. 2016(10)
[4]基于Act1/NF-κB信号通路探讨类风湿关节炎患者血瘀状态的机制及新风胶囊对其影响[J]. 章平衡,刘健,谈冰,万磊. 中国中西医结合杂志. 2016(08)
[5]补肾活血方对老年高血压肝肾亏虚兼血瘀证患者血管内皮功能的影响[J]. 盛涵恩,王红玲. 河南中医. 2016(08)
[6]川芎的活性成分及其心血管系统保护作用研究进展[J]. 朱尧,刘溦溦,顾宁,史爱武. 时珍国医国药. 2016(07)
[7]血管内皮细胞miRNAs与高血压病血瘀证的相关性研究进展[J]. 黄守清,许艺惠,尹莲花. 医学综述. 2016(11)
[8]桃红四物汤对产后血瘀大鼠血清NO、子宫组织VEGF的表达及对PI3K/Akt信号通路的影响[J]. 韩岚,梁杰,张艳艳,季兆洁,李珊珊,郭栋栋,吴欢茹,彭代银. 中华中医药杂志. 2016(05)
[9]益气活血方对糖尿病大鼠p38MAPK通路的影响[J]. 鲍陶陶,杨晓春,储全根,黄菊. 中国实验方剂学杂志. 2016(08)
[10]洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究[J]. 林红. 北方药学. 2016(04)
博士论文
[1]饱餐与饥饿对小鼠动脉粥样硬化形成及心肌能量代谢的影响及机制研究[D]. 程文.山东大学 2016
[2]急性冠脉综合征介入前后中医证候要素演变规律及益气活血中药作用机制研究[D]. 张大武.中国中医科学院 2010
[3]基于HUVECM和色谱质谱联用的药物筛选模型的建立及其应用[D]. 岳宣峰.陕西师范大学 2009
[4]龙牙楤木总苷对大鼠心肌缺血再灌注相关粘附分子表达的影响[D]. 李明.北京中医药大学 2009
[5]老龄大鼠脑缺血/再灌注细胞凋亡及相关基因表达和脑脉通对其影响[D]. 任小巧.北京中医药大学 2003
[6]川芎挥发油解热作用及其部分机理探讨[D]. 杨金蓉.成都中医药大学 2002
[7]奶芎、山川芎与川芎的品质比较研究[D]. 刘圆.成都中医药大学 2002
硕士论文
[1]蒸馏—萃取耦合法提取川芎挥发油工艺研究及其质量评价[D]. 胡春兰.承德医学院 2015
[2]藁本内酯对猪冠状动脉舒张作用机理探讨及药效学研究[D]. 李玲.兰州大学 2014
[3]川芎挥发油软胶囊中试放大及药理毒理研究[D]. 张丽娟.第二军医大学 2014
[4]丹参酮ⅡA对血管内皮损伤的类雌激素样保护效应及机制研究[D]. 刘欣.北京中医药大学 2013
[5]川芎挥发油对皮肤瘢痕增生的治疗作用及其安全性评价[D]. 冉霞.华东师范大学 2012
[6]复方地龙胶囊对气虚血瘀证大鼠基础指标及血管内皮损伤研究[D]. 窦倩.天津医科大学 2012
[7]川芎油软胶囊治疗偏头痛急性发作期（血瘀证）即刻止痛作用的临床研究[D]. 李斌.成都中医药大学 2012
[8]基于数据挖掘的川芎挥发油有效成分辨识研究[D]. 陈畅.西南交通大学 2009
[9]川芎油软胶囊治疗偏头痛（血瘀证）的临床观察[D]. 崔占举.成都中医药大学 2009
[10]川芎油软胶囊治疗偏头痛的临床观察及疗效分析[D]. 葛鑫宇.南方医科大学 2009
本文编号：3366781
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