丹参内生真菌及其抗肿瘤细胞活性物质的分离鉴定

发布时间：2021-08-28 17:21

　　丹参（Salvia miltiorrhiza）,作为鼠尾草属中极有价值的药用植物,具有活血,降血脂,抗肿瘤等生物活性。研究显示,植物内生真菌能分泌一些和宿主相同或类似的活性化合物,因此,通过研究内生真菌的次级代谢产物来寻找新的药源具有十分重要的研究意义。本研究对丹参内生真菌进行分离,鉴定和筛选,并对其中一株抗肿瘤细胞活性高的菌株进行培养基和发酵条件的优化及次级代谢产物的分离鉴定,具体研究结果如下:1.采用8种选择性培养基对丹参进行内生真菌的分离,共分到122株,根中分离到的真菌数量比茎、叶和花要多。形态学特征和ITS测序结果表明,分离的真菌属于2个亚门、8个纲、10个目、13个科和20个属。2.通过Alamar Blue法将浓度为100μg/m L的丹参内生真菌进行体外抗肿瘤细胞活性实验,以抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）作为阳性对照。初筛结果表明,对HepG2的抑制率高于50%的有10株;复筛显示其中一株离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）KLBMPSM007表现出较强的抗肿瘤细胞活性。3.以抗肿瘤细胞活性为主要的指标,对高活菌株KLBMPSM007的培养基和发酵... 

【文章来源】：江苏师范大学江苏省

【文章页数】：122 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 引言
    1.2 植物内生真菌
        1.2.1 植物内生真菌概述
        1.2.2 植物内生真菌多样性
        1.2.3 植物内生真菌的生物活性
    1.3 丹参
        1.3.1 丹参概况
        1.3.2 丹参内生真菌研究进展
    1.4 选题背景
    1.5 本论文研究的目的、意义及内容
2 丹参可培养内生真菌多样性
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 培养基与试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 丹参样品的采集
        2.2.2 丹参内生真菌的分离与纯化
        2.2.3 表面消毒可靠性检测方法
        2.2.4 丹参内生真菌的形态鉴定
        2.2.5 丹参内生真菌的分子鉴定
        2.2.6 丹参内生真菌多样性及系统发育树的构建
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 表面消毒的可靠性
        2.3.2 表面灭菌条件的筛选
        2.3.3 丹参内生真菌的分离结果
        2.3.4 凝胶电泳结果
        2.3.5 丹参内生真菌多样性初步分析
        2.3.6 系统发育树的构建
        2.3.7 讨论
    2.4 本章小结
3 丹参内生真菌代谢产物的抗肿瘤细胞活性初步探究
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要试剂与溶液
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 真菌粗提物的制备
        3.2.2 细胞的培养
        3.2.3 真菌粗提物抗肿瘤细胞活性的初筛
        3.2.4 真菌粗提物抗肿瘤细胞活性的复筛
        3.2.5 菌株KLBMPSM007不同有机相粗提物的抗肿瘤细胞活性
        3.2.6 菌株KLBMPSM007不同浓度的粗提物抗肿瘤细胞活性
    3.3 实验结果与讨论
        3.3.1 真菌粗提物的抗肿瘤细胞活性的初筛
        3.3.2 真菌粗提物的抗肿瘤细胞活性的复筛
        3.3.3 菌株KLBMPSM007不同有机相的抗肿瘤细胞活性
        3.3.4 菌株KLBMPSM007乙酸乙酯相的抗肿瘤细胞活性
        3.3.5 讨论
    3.4 本章小结
4 菌株KLBMPSM007发酵培养基和发酵条件优化
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 种子液的制备
        4.2.2 对照实验
        4.2.3 液体发酵培养基和培养条件优化
        4.2.4 固体发酵培养条件优化
    4.3 实验结果与讨论
        4.3.1 液体发酵培养基和培养条件优化
        4.3.2 固体发酵培养条件优化
        4.3.3 讨论
    4.4 本章小结
5 菌株KLBMPSM007发酵产物化学成分初步研究
    5.1 材料与仪器
        5.1.1 材料
        5.1.2 试剂
        5.1.3 仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 菌株KLBMPSM007的发酵培养
        5.2.2 菌株KLBMPSM007弱极性成分的GC-MS分析
        5.2.3 菌株KLBMPSM007的分离纯化
        5.2.4 化合物抗肿瘤细胞活性检测
    5.3 实验结果与讨论
        5.3.1 菌株KLBMPSM007弱极性成分的GC-MS分析
        5.3.2 化合物分离纯化
        5.3.3 化合物结构鉴定
        5.3.4 化合物抗肿瘤细胞活性结果
        5.3.5 讨论
    5.4 本章小结
6 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
附录
参考文献
致谢
作者简介
学位论文数据集


【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参中麦角甾醇高产内生真菌的鉴定及分析[J]. 李秀清,舒志恒,明乾良,秦路平,郑承剑.  药学服务与研究. 2016(06)
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硕士论文
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[3]野生稻内生真菌对水稻和烟草幼苗的促生作用研究[D]. 徐佰鸽.浙江大学 2012



本文编号：3368932