土槿皮乙酸诱导人肝癌细胞周期延迟及凋亡的机制研究
发布时间：2021-09-04 23:37
目的:原发性肝癌是一种恶性肿瘤,在我国比较常见,在消化系统恶性肿瘤中原发性肝癌的死亡率居于第3位,每年我国死于肝癌的患者大约11万人,中国原发性肝癌的死亡人数占世界范围内的45%。手术切除是治疗肝癌的主要方式,目前没有针对性的治疗药物。中药单体化合物土槿皮乙酸（Pseudolaric Acid B,PAB）是从土槿皮中分离获得的一种新型二萜酸。有研究证明PAB具有抗微管、抗血管生成、抗肿瘤等药理作用。本实验对其抗肝癌作用及作用机制进行了分析。方法:MTT法确定土槿皮乙酸是否具有抑制肿瘤细胞增殖的能力;荧光染色法检测土槿皮乙酸处理后SMMC7721细胞微管聚集情况;土槿皮乙酸处理后的肝癌细胞SMMC7721转移的情况用划痕法来确定;土槿皮乙酸诱导的细胞死亡通过细胞形态学观察细胞形态学变化确定;DNA琼脂糖凝胶电泳确定土槿皮乙酸是否诱导SMMC7721细胞凋亡的发生;流式细胞仪检测土槿皮乙酸对细胞周期的影响;土槿皮乙酸对基因CyclinB1和CDK1的转录的影响用Real-time PCR检测;细胞凋亡和周期相关蛋白的表达应用Western blot方法检测,通过如上方法确定土槿皮乙酸诱导...
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
凋亡细胞的DNA变化
图 3 Caspase 激活通路图当下游的 Caspase 在活化后会执行相应的功能（Table 1-1）。研究发现 Caspase 的底可以分为四类：第一类，被激活的底物，例如 Caspase 本身，还有被 Caspase 激活的NA 酶（CAD）。第二类，被失活的底物，例如 DNA 蛋白激酶（DNA-PK），还有视网神经胶质瘤的抑制蛋白。第三类，一些结构蛋白，结构蛋白的聚集或解聚被 Caspase 蛋的切割影响，例如，A-型核层蛋白和 B-型核层蛋白（lamins）。第四类，明确了 Caspase白对底物的切断作用，但具体后果不清楚。Table. 1-1 Human Caspase SuperfamilyProteases Alternative Names Sequence SubstratesCaspase-1 ICE YVAD pro-IL1 , pro-Caspase 3 and4Caspase-2 ICH-1 DXXD PARPCaspase-3 CPP32, Yama,DEXD PARP, DNA-PK, SRE/BP,
图 4 细胞周期的概述Overview of the eukaryotic cell cycle在 G1期内，为了合成 DNA，细胞会准备 DNA 合成所需要的蛋白质及 mRNA 等物质，进而为 DNA 的复制做好准备。研究发现，细胞周期的第一个细胞周期检验点位于G1/S 期交界处，当生长因子刺激信号持续存在的时候，细胞可以跃过这个检验，顺利进入到 S 期，但如果检查到异常情况，细胞周期将会停止，不会进行 DNA 复制，所以 G1/期检查点保证了 S 期进入的准确性。在 S 期内，细胞会进行 DNA 的合成和基因组的复制，这个过程极易引起突变的进入，所以 S 期较短。但是当细胞进入到 S 期后，则无论是否发生 DNA 损伤且还是是否缺少生长因子刺激信号，DNA 的复制都会完成，所以 期的不恰当进入导致了基因突变、缺失、插入的存在。DNA 复制后，细胞周期会从 期进入 G2期，在 G2 期准备了有丝分裂和细胞分裂的物质和原料。在进行有丝分裂前细胞会检查 DNA 复制是否正确，是有累积了过多的 DNA 损伤，这些工作在细胞周期的 G期完成，如有 DNA 损伤，则进行修复，如果修复无法完成则细胞死亡。然后，如
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cell cycle regulation and anticancer drug discovery[J]. Jingwen Bai,Yaochen Li,Guojun Zhang. Cancer Biology & Medicine. 2017(04)
[2]中药治疗肝癌机制的研究进展[J]. 贺珊,廖长秀. 中成药. 2017(01)
[3]羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究[J]. 王熙熙,王景景,王旭,范盎然,于雪,胡京红,解华,徐莹莹,刘丽,臧宝霞,张前. 北京中医药大学学报. 2016(08)
[4]蛇床子素抑制膀胱癌细胞生长和侵袭的机制[J]. 刘军,徐冉,赵晓昆. 中南大学学报(医学版). 2016(04)
[5]细胞周期与肿瘤转化医学[J]. 詹启敏,陈杰. 中国肿瘤临床. 2014(01)
[6]复方中药对小鼠肺癌细胞凋亡的影响[J]. 梁朝晖,潘智然,李娟. 世界中西医结合杂志. 2008(11)
[7]西黄丸对肝癌细胞SMMC7721分泌的血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶2、9的影响[J]. 金沈锐,张新胜,祝彼得,秦旭华. 中成药. 2008(07)
[8]中药“松友饮”对高转移人肝癌侵袭性及小鼠免疫功能的影响[J]. 黄修燕,黄自丽,晁愚,王鲁,周俭,叶胜龙,汤钊猷. 肿瘤. 2008(06)
[9]清开灵注射液对HepG2细胞u-PAR表达影响的实验研究[J]. 王文花,单泽松,胡海燕,张晓艳. 中华中医药学刊. 2008(06)
[10]康莱特注射液抗恶性肿瘤肝转移疗效及机制的实验研究[J]. 黄挺,陈震,杨雪飞,李勇,张志娣,黄伶,张建刚,张晓丽. 中国现代应用药学. 2008(01)
本文编号：3384223
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
凋亡细胞的DNA变化
图 3 Caspase 激活通路图当下游的 Caspase 在活化后会执行相应的功能（Table 1-1）。研究发现 Caspase 的底可以分为四类：第一类，被激活的底物，例如 Caspase 本身，还有被 Caspase 激活的NA 酶（CAD）。第二类，被失活的底物，例如 DNA 蛋白激酶（DNA-PK），还有视网神经胶质瘤的抑制蛋白。第三类，一些结构蛋白，结构蛋白的聚集或解聚被 Caspase 蛋的切割影响，例如，A-型核层蛋白和 B-型核层蛋白（lamins）。第四类，明确了 Caspase白对底物的切断作用，但具体后果不清楚。Table. 1-1 Human Caspase SuperfamilyProteases Alternative Names Sequence SubstratesCaspase-1 ICE YVAD pro-IL1 , pro-Caspase 3 and4Caspase-2 ICH-1 DXXD PARPCaspase-3 CPP32, Yama,DEXD PARP, DNA-PK, SRE/BP,
图 4 细胞周期的概述Overview of the eukaryotic cell cycle在 G1期内，为了合成 DNA，细胞会准备 DNA 合成所需要的蛋白质及 mRNA 等物质，进而为 DNA 的复制做好准备。研究发现，细胞周期的第一个细胞周期检验点位于G1/S 期交界处，当生长因子刺激信号持续存在的时候，细胞可以跃过这个检验，顺利进入到 S 期，但如果检查到异常情况，细胞周期将会停止，不会进行 DNA 复制，所以 G1/期检查点保证了 S 期进入的准确性。在 S 期内，细胞会进行 DNA 的合成和基因组的复制，这个过程极易引起突变的进入，所以 S 期较短。但是当细胞进入到 S 期后，则无论是否发生 DNA 损伤且还是是否缺少生长因子刺激信号，DNA 的复制都会完成，所以 期的不恰当进入导致了基因突变、缺失、插入的存在。DNA 复制后，细胞周期会从 期进入 G2期，在 G2 期准备了有丝分裂和细胞分裂的物质和原料。在进行有丝分裂前细胞会检查 DNA 复制是否正确，是有累积了过多的 DNA 损伤，这些工作在细胞周期的 G期完成，如有 DNA 损伤，则进行修复，如果修复无法完成则细胞死亡。然后，如
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cell cycle regulation and anticancer drug discovery[J]. Jingwen Bai,Yaochen Li,Guojun Zhang. Cancer Biology & Medicine. 2017(04)
[2]中药治疗肝癌机制的研究进展[J]. 贺珊,廖长秀. 中成药. 2017(01)
[3]羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究[J]. 王熙熙,王景景,王旭,范盎然,于雪,胡京红,解华,徐莹莹,刘丽,臧宝霞,张前. 北京中医药大学学报. 2016(08)
[4]蛇床子素抑制膀胱癌细胞生长和侵袭的机制[J]. 刘军,徐冉,赵晓昆. 中南大学学报(医学版). 2016(04)
[5]细胞周期与肿瘤转化医学[J]. 詹启敏,陈杰. 中国肿瘤临床. 2014(01)
[6]复方中药对小鼠肺癌细胞凋亡的影响[J]. 梁朝晖,潘智然,李娟. 世界中西医结合杂志. 2008(11)
[7]西黄丸对肝癌细胞SMMC7721分泌的血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶2、9的影响[J]. 金沈锐,张新胜,祝彼得,秦旭华. 中成药. 2008(07)
[8]中药“松友饮”对高转移人肝癌侵袭性及小鼠免疫功能的影响[J]. 黄修燕,黄自丽,晁愚,王鲁,周俭,叶胜龙,汤钊猷. 肿瘤. 2008(06)
[9]清开灵注射液对HepG2细胞u-PAR表达影响的实验研究[J]. 王文花,单泽松,胡海燕,张晓艳. 中华中医药学刊. 2008(06)
[10]康莱特注射液抗恶性肿瘤肝转移疗效及机制的实验研究[J]. 黄挺,陈震,杨雪飞,李勇,张志娣,黄伶,张建刚,张晓丽. 中国现代应用药学. 2008(01)
本文编号：3384223
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