归芪多糖延缓细胞衰老的分子作用机制
发布时间：2021-09-24 02:58
以SIRT1和线粒体为切入点,采用分子生物学技术以及多种线粒体分析技术,深入探讨SIRT1和线粒体在衰老细胞中的作用,揭示归芪多糖延缓细胞衰老的分子作用机制。结果表明,AAP显著降低细胞的衰老程度并提高细胞活力,而Ex527阻断AAP的作用。同时,发现AAP增强细胞内SIRT1和CyclinD1的表达,降低p53的表达水平,在Ex527组中未观察到类似的逆转作用。线粒体分析结果显示,AAP可显著降低细胞内的活性氧水平,降低线粒体膜电位,减轻线粒体肿胀程度和增加线粒体内ATP含量,而Ex527的预处理消除这些作用。基于上述结果,推测AAP可能通过信号通路p53/p16和CyclinD/CDK4来改善线粒体功能,从而达到延缓衰老的作用,且这些作用与SIRT1密切相关。
【文章来源】：西北农业学报. 2020,29(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
细胞形态图(×200)
在正常的人类细胞中, p53或 p21基因的失活可以延长细胞的复制寿命[17]。此外,研究表明,ROS/p53/p21信号通路在衰老中起着至关重要的作用[18]。研究[19]还显示,人参,三七和川芎提取物可以通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达来延迟大鼠血管平滑肌细胞的衰老。蛋白质检测结果如图4和图5所示,与正常对照组相比,H2O2组中SIRT1和CyclinD1蛋白的表达水平明显降低,p53蛋白的表达水平显著升高,AAP的干预显著提高SIRT1和CyclinD1蛋白的表达水平,同时下调p53蛋白的表达水平,Ex527逆转以上相应作用,白藜芦醇对以上蛋白产生同样的调控作用,且与AAP相比无显著性差异。此结果表明,AAP和白藜芦醇通过影响p53、CyclinD1及其下游信号分子的表达达到其抗衰老作用,而这些通路很有可能是经过SIRT1直接或间接调控的。图4 蛋白表达结果
ROS水平检测是基于荧光染料DCFH - DA(2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯)的荧光强度变化来定量检测细胞内活性氧种类的最常用方法。DCFH - DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜。进入细胞后,它可以被细胞中的酯酶水解生成DCFH,而DCFH不会穿透细胞膜,因此探针很容易在细胞中积聚。细胞中的活性氧可以氧化非荧光DCFH,产生荧光DCF。荧光强度与活性氧水平成正比。结果如图6和图7所示,AAP明显降低H2O2所诱导的细胞内活性氧的水平,而在Ex527预处理的细胞中未发现这样的趋势,同样的趋势也出现在白藜芦醇组中,这表明AAP和白藜芦醇可通过降低细胞内活性氧的水平来延缓细胞衰老,且可能是由SIRT1介导的。图6 活性氧测定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]复方人参皂苷纳米乳对OVA接种小鼠免疫功能的影响[J]. 曹发昊,张百胜,王艳萍,欧阳五庆. 西北农业学报. 2018(12)
[2]中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响[J]. 马昭,杨莉,刘晓婷,乔彦杰,张静,朱晓庆,谷新利. 西北农业学报. 2018(10)
[3]白藜芦醇通过促进SIRT1表达,抑制NF-κB和TNF-α表达抵抗牛磺胆酸诱导的胎盘合体滋养细胞HTR-8的炎症损伤[J]. 李治遵,邵勇. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(05)
[4]TNF-α诱导人类成纤维细胞DNA损伤及衰老的机制研究[J]. 冯子懿. 生物技术世界. 2016(01)
[5]p53-p21通路在动脉血管平滑肌细胞衰老中的作用研究[J]. 蔺昕燕,贾玉红,郭连英,贾玉杰,徐婷婷. 大连医科大学学报. 2015(04)
[6]归芪多糖对衰老细胞周期及p53、p16蛋白的影响[J]. 蒲秀瑛,于双,樊文博,任菁,刘璐,马小龙,张伟杰. 中医药学报. 2015(04)
[7]白藜芦醇通过上调SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤[J]. 夏洪娟,王延鹏,朱伟,辛平,魏盟. 中国药理学通报. 2014(02)
[8]细胞衰老与衰老相关性疾病[J]. 付小明,花芳,胡卓伟. 生理科学进展. 2012(05)
[9]线粒体酶活性及线粒体肿胀与不同运动强度的关系[J]. 徐莉,曹颖,张敏. 中国组织工程研究. 2012(42)
[10]线粒体生物学性状及细胞衰老和运动的影响[J]. 付玉,王文迪,许苏旸,苏全生. 中国组织工程研究. 2012(11)
本文编号：3406954
【文章来源】：西北农业学报. 2020,29(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
细胞形态图(×200)
在正常的人类细胞中, p53或 p21基因的失活可以延长细胞的复制寿命[17]。此外,研究表明,ROS/p53/p21信号通路在衰老中起着至关重要的作用[18]。研究[19]还显示,人参,三七和川芎提取物可以通过改变p16-cyclin D/CDK-Rb通路因子的表达来延迟大鼠血管平滑肌细胞的衰老。蛋白质检测结果如图4和图5所示,与正常对照组相比,H2O2组中SIRT1和CyclinD1蛋白的表达水平明显降低,p53蛋白的表达水平显著升高,AAP的干预显著提高SIRT1和CyclinD1蛋白的表达水平,同时下调p53蛋白的表达水平,Ex527逆转以上相应作用,白藜芦醇对以上蛋白产生同样的调控作用,且与AAP相比无显著性差异。此结果表明,AAP和白藜芦醇通过影响p53、CyclinD1及其下游信号分子的表达达到其抗衰老作用,而这些通路很有可能是经过SIRT1直接或间接调控的。图4 蛋白表达结果
ROS水平检测是基于荧光染料DCFH - DA(2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯)的荧光强度变化来定量检测细胞内活性氧种类的最常用方法。DCFH - DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜。进入细胞后,它可以被细胞中的酯酶水解生成DCFH,而DCFH不会穿透细胞膜,因此探针很容易在细胞中积聚。细胞中的活性氧可以氧化非荧光DCFH,产生荧光DCF。荧光强度与活性氧水平成正比。结果如图6和图7所示,AAP明显降低H2O2所诱导的细胞内活性氧的水平,而在Ex527预处理的细胞中未发现这样的趋势,同样的趋势也出现在白藜芦醇组中,这表明AAP和白藜芦醇可通过降低细胞内活性氧的水平来延缓细胞衰老,且可能是由SIRT1介导的。图6 活性氧测定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]复方人参皂苷纳米乳对OVA接种小鼠免疫功能的影响[J]. 曹发昊,张百胜,王艳萍,欧阳五庆. 西北农业学报. 2018(12)
[2]中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响[J]. 马昭,杨莉,刘晓婷,乔彦杰,张静,朱晓庆,谷新利. 西北农业学报. 2018(10)
[3]白藜芦醇通过促进SIRT1表达,抑制NF-κB和TNF-α表达抵抗牛磺胆酸诱导的胎盘合体滋养细胞HTR-8的炎症损伤[J]. 李治遵,邵勇. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(05)
[4]TNF-α诱导人类成纤维细胞DNA损伤及衰老的机制研究[J]. 冯子懿. 生物技术世界. 2016(01)
[5]p53-p21通路在动脉血管平滑肌细胞衰老中的作用研究[J]. 蔺昕燕,贾玉红,郭连英,贾玉杰,徐婷婷. 大连医科大学学报. 2015(04)
[6]归芪多糖对衰老细胞周期及p53、p16蛋白的影响[J]. 蒲秀瑛,于双,樊文博,任菁,刘璐,马小龙,张伟杰. 中医药学报. 2015(04)
[7]白藜芦醇通过上调SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤[J]. 夏洪娟,王延鹏,朱伟,辛平,魏盟. 中国药理学通报. 2014(02)
[8]细胞衰老与衰老相关性疾病[J]. 付小明,花芳,胡卓伟. 生理科学进展. 2012(05)
[9]线粒体酶活性及线粒体肿胀与不同运动强度的关系[J]. 徐莉,曹颖,张敏. 中国组织工程研究. 2012(42)
[10]线粒体生物学性状及细胞衰老和运动的影响[J]. 付玉,王文迪,许苏旸,苏全生. 中国组织工程研究. 2012(11)
本文编号：3406954
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