黄苳苷通过抑制ROS-内质网应激PERK通路减轻低氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡
发布时间：2021-11-01 04:22
背景:急性肾损伤（Acute kidney injury,AKI）是临床常见的危重症。缺血再灌注损伤（Ischemia reperfusion injury,IRI）是导致AKI的常见原因,其中肾小管上皮细胞（Tubular epithelial cells,TECs）凋亡在IRI诱导的AKI发病机制中发挥着重要的作用。严重或者持续的内质网应激可引起细胞凋亡。黄芩苷是一种从中药中提取的具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等药理作用的黄酮类化合物,而且对多种器官的IRI有保护作用。但黄芩苷在保护IRI诱导的肾脏损害机制有待进一步研究。目的:建立低氧/复氧诱导的细胞模型模拟IRI,探讨黄芩苷是否能减轻肾小管上皮细胞（Human kidney 2 cell line,HK2细胞）凋亡及其作用机制。方法:采用HK2细胞构建IR模型,Western blot检测内质网应激相关蛋白BIP、PERK、ATF4、CHOP、Caspase12、ATF6、IRE1和凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达,免疫荧光检测BIP的荧光强度,CCK8检测细胞死亡率,流式细胞计数和TUNEL检测细胞凋亡;进一步采用...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：39 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
内质网应激调节通路
图 2. 黄芩苷减轻低氧/复氧诱导的 HK2 细胞死亡率和凋亡Figure 2. Baicalin attenuated H/R-induced cell death and cell apoptosis in HK-2 cells（A）CCK8 检测细胞死亡率。 , p<0.05 vs. 常氧组；#, p<0.05 vs. 黄芩苷；Δ, p<0.05 vs,低 氧 / 复 氧 组 ； &, p<0.05 vs. 低 氧 / 复 氧 +25μmol/L 黄 芩 苷 组 ; (B,C) Western blot 检 测Cleaved-caspase3 蛋白表达;（D-F）流失细胞仪（D,E）和 TUNEL（F,200×）检测细胞凋亡。n=3. , p<0.05 vs. 对照组; #, p<0.05 vs. 黄芩苷组; Δ, p<0.05 vs. 低氧/复氧组。对照组：细胞在常氧孵箱培养；黄芩苷组：细胞在常氧孵箱培养，100μmol/L 黄芩苷预处理 2h；低氧/复氧组：细胞先在低氧孵箱培养 24h，继之在常氧孵箱培养 2h 复氧；低氧/复氧+黄芩苷组：100μmol/L黄芩苷预处理 2h 后，先在低氧孵箱培养 24h，继之在常氧孵箱培养 2h 复氧。(A) Cell death was measured by CCK-8 assay. , p<0.05 vs. control group, #, p<0.05 vs.Baicalin group, Δ, p<0.05 vs, H/R group. &, p<0.05 vs. H/R+25μmol/L Baicalin group. Afterpretreatment with or without 100μmol/L Baicalin for 2h, HK-2 cells were treated with eithernormoxia or 24h of hypoxia followed by 2h of reoxygenation. (B) Cleaved-caspase3 expression wasdetected by western blotting. (C) Relative quantification of Cleaved-caspase3 expression in Fig. 2B.(D-F) Apoptosis was measured by flow cytometry (D, E) and TUNEL assay (F, magnification 200×).
2.2 低氧/复氧对 HK2 细胞内内质网应激的影响为验证低氧/复氧是否可以诱导 HK2 细胞的内质网应激，本文通过 Western blot检测内质网应激相关信号蛋白的表达。结果发现，与对照组相比，低氧/复氧诱导的 HK2 细胞内质网应激标志性蛋白 BIP 和 Caspase 12 表达明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3A,B,H）；同时免疫荧光检测进一步显示，低氧/复氧诱导HK2 细胞 BIP 蛋白荧光表达强度明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3I,J），提示低氧/复氧可以增强 HK2 细胞的内质网应激。内质网应激主要包括 PERK,IRE1 和 ATF6 这三条信号通路，本文研究发现，与对照组相比，低氧/复氧诱导后，HK2细胞PERK, ATF4和CHOP蛋白表达均明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3A,C-E）；但是，ATF6 和 IRE1 蛋白表达水平未见明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）（3A,F,G），提示低氧/复氧通过激活 PERK 信号通路增加 HK2 细胞的内质网应激。
本文编号：3469484
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：39 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
内质网应激调节通路
图 2. 黄芩苷减轻低氧/复氧诱导的 HK2 细胞死亡率和凋亡Figure 2. Baicalin attenuated H/R-induced cell death and cell apoptosis in HK-2 cells（A）CCK8 检测细胞死亡率。 , p<0.05 vs. 常氧组；#, p<0.05 vs. 黄芩苷；Δ, p<0.05 vs,低 氧 / 复 氧 组 ； &, p<0.05 vs. 低 氧 / 复 氧 +25μmol/L 黄 芩 苷 组 ; (B,C) Western blot 检 测Cleaved-caspase3 蛋白表达;（D-F）流失细胞仪（D,E）和 TUNEL（F,200×）检测细胞凋亡。n=3. , p<0.05 vs. 对照组; #, p<0.05 vs. 黄芩苷组; Δ, p<0.05 vs. 低氧/复氧组。对照组：细胞在常氧孵箱培养；黄芩苷组：细胞在常氧孵箱培养，100μmol/L 黄芩苷预处理 2h；低氧/复氧组：细胞先在低氧孵箱培养 24h，继之在常氧孵箱培养 2h 复氧；低氧/复氧+黄芩苷组：100μmol/L黄芩苷预处理 2h 后，先在低氧孵箱培养 24h，继之在常氧孵箱培养 2h 复氧。(A) Cell death was measured by CCK-8 assay. , p<0.05 vs. control group, #, p<0.05 vs.Baicalin group, Δ, p<0.05 vs, H/R group. &, p<0.05 vs. H/R+25μmol/L Baicalin group. Afterpretreatment with or without 100μmol/L Baicalin for 2h, HK-2 cells were treated with eithernormoxia or 24h of hypoxia followed by 2h of reoxygenation. (B) Cleaved-caspase3 expression wasdetected by western blotting. (C) Relative quantification of Cleaved-caspase3 expression in Fig. 2B.(D-F) Apoptosis was measured by flow cytometry (D, E) and TUNEL assay (F, magnification 200×).
2.2 低氧/复氧对 HK2 细胞内内质网应激的影响为验证低氧/复氧是否可以诱导 HK2 细胞的内质网应激，本文通过 Western blot检测内质网应激相关信号蛋白的表达。结果发现，与对照组相比，低氧/复氧诱导的 HK2 细胞内质网应激标志性蛋白 BIP 和 Caspase 12 表达明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3A,B,H）；同时免疫荧光检测进一步显示，低氧/复氧诱导HK2 细胞 BIP 蛋白荧光表达强度明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3I,J），提示低氧/复氧可以增强 HK2 细胞的内质网应激。内质网应激主要包括 PERK,IRE1 和 ATF6 这三条信号通路，本文研究发现，与对照组相比，低氧/复氧诱导后，HK2细胞PERK, ATF4和CHOP蛋白表达均明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）（图 3A,C-E）；但是，ATF6 和 IRE1 蛋白表达水平未见明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）（3A,F,G），提示低氧/复氧通过激活 PERK 信号通路增加 HK2 细胞的内质网应激。
本文编号：3469484
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