补肾活血汤对裸鼠乳腺癌骨转移模型及OPG/RANK/RANKL系统影响的研究
发布时间：2021-11-09 23:36
目的:构建裸鼠乳腺癌骨转移模型,观察并研究补肾活血汤对裸鼠乳腺癌骨转移模型OPG/RANKL/RANK系统的影响。方法:将雌性裸鼠56只,按体重分层后以完全随机法分为空白组、模型组、唑来膦酸组、补肾活血高、中、低浓度组、活血组、补肾组,每组7只,共8组。除去空白组,所有组别同时构建乳腺癌骨转移模型。具体构建步骤如下:将（0.1ml,1×107/ml）人乳腺癌MDA-MB-231细胞混悬液注射于裸鼠左心室以构建乳腺癌骨转移模型,构建模型成功后,密切观察裸鼠生命活动并记录裸鼠体质质量变化情况。在造模成功后的第二天开始,除空白组不做处理,照常饲养,对其余各组进行持续6周的药物进行干预,具体药物干预方法如下:模型组给予每日0.2ml 0.9%NS灌胃;唑来膦酸组予以每周1次（100μg/kg）的腹腔注射;补肾活血汤低浓度组、补肾活血汤中浓度组、补肾活血汤高浓度组裸鼠予以生药灌胃,浓度依次为每日10.5g/kg·d、21g/kg·d、42g/kg·d;活血组（补肾活血汤拆方所得）每日予以生药灌胃,浓度为3.6g/kg·d;补肾组（补肾活血汤拆方所得）每日予以生药灌胃,浓度为17.4g/kg·d。...
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
培养中的人乳腺癌细胞
2.1.1 细胞培养在75 ㎝2面积的培养瓶中培养人乳腺癌MDA-MB-231 细胞，采用DMEM高糖培养+10%FBS+双抗（100U/ml青/链霉素），控制培养箱温度为 37℃、5%CO2的饱和湿度。2.1.2 人乳腺癌细胞的传代过程人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞（图 1）培养 2-3 天左右，细胞即生长至90%融合，此时开始传代。具体方法如下:①将瓶内旧培养基弃去②用 1ml 移液枪头吸取2mlPBS液洗涤培养瓶2次③在瓶内加入2ml 0.25%胰蛋白酶并使其均匀平铺遍布所有细胞表面，静置后于显微镜下可见细胞变圆且细胞间隙增大（图 2）④立即加入培养基 4ml-5ml 中和胰酶终止消化⑤用巴氏吸管反复吹打瓶内细胞，使其形成单细胞悬液⑥之后将混悬液移液到 3 个 75 ㎝2培养瓶中进行体外传代，并分别加入5-7ml左右培养基，放置培养箱中培养（37℃、5%CO2的饱和湿度）。
⑷将含有乳腺癌MDA-MB-231细胞混悬液的培养液用移液枪头吸取至离心管中，打开离心机，设置转速：（1000rpm/min），设定离心时间 5min ，离心完成之后弃上清液，重复加入5mlPBS 再次离心，弃上清液，再加 2mlPBS，反复轻轻吹打，混悬，最终制成 1×107/ml 的乳腺癌细胞悬液，用冰盒保存（过程中离心管口反复酒精灯火焰消毒）。2.2 饲养裸鼠所有实验所用裸鼠均在湖南中医药大学实验楼SPF级实验室饲养，分笼饲养，每笼7只，在人工光照周期下，自由进食和水（图 3），自然喂养1周后依照体重分层，随机数字表法分为补肾组、模型组、空白组、唑来膦酸组、补肾活血高、中、低浓度组、活血组共8 组，每组 7 只。除空白组外，其余组均开始造模。注：造模前各组统一饲养，避免人为分组提前造成选择性偏移。
【参考文献】：
期刊论文
[1]补肾活血方应用于多囊卵巢综合征患者的效果及对生殖激素的影响分析[J]. 徐玉慧. 医学理论与实践. 2018(21)
[2]基于OPG/RANKL/RANK信号通路探究中药对破骨细胞的调控作用[J]. 张楚天,林燕萍. 康复学报. 2018(05)
[3]中医“肾精”的现代医学内涵[J]. 徐德成,马迎民,范吉平. 中医杂志. 2017(22)
[4]中医药治疗乳腺癌进展[J]. 周思颖,张思杰,徐寒子,孙大伟,唐金海. 中国中医基础医学杂志. 2017(10)
[5]逍遥散合二至丸加减治疗乳腺癌内分泌治疗后类更年期综合征临床观察[J]. 赵淑媛,赵常国,杨小霞. 四川中医. 2017(06)
[6]淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ通过AP-1/NFATc1信号通路调控破骨细胞生成[J]. 贺龙刚,高奥,邱煌沛,李文,林晓辉,周丽. 中华中医药杂志. 2017(03)
[7]乳腺癌骨转移过程中的分子机制[J]. 吴玲,王佳,吴英,夏添松. 中国肿瘤外科杂志. 2017(01)
[8]乳腺癌骨转移机制与靶向治疗进展[J]. 鲁光平,殷咏梅,周雪峰,潘骥群,陈进. 现代肿瘤医学. 2017(02)
[9]补肾活血汤对SDF-1α诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响[J]. 杨争,胡金辉,王希,方颖,袁博,陈杏元,刘德果. 时珍国医国药. 2016(08)
[10]中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2015版）[J]. 中国癌症杂志. 2015(09)
博士论文
[1]补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型的影响[D]. 姚暄.北京中医药大学 2009
硕士论文
[1]补肾活血汤对裸鼠乳腺癌骨转移模型和Jagged1/Notch及TGF-β通路蛋白的干预研究[D]. 王贤彬.湖南中医药大学 2018
[2]补肾法对绝经后芳香化酶抑制剂治疗乳腺癌患者雌激素水平的影响[D]. 喻璐.广州中医药大学 2012
本文编号：3486122
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
培养中的人乳腺癌细胞
2.1.1 细胞培养在75 ㎝2面积的培养瓶中培养人乳腺癌MDA-MB-231 细胞，采用DMEM高糖培养+10%FBS+双抗（100U/ml青/链霉素），控制培养箱温度为 37℃、5%CO2的饱和湿度。2.1.2 人乳腺癌细胞的传代过程人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞（图 1）培养 2-3 天左右，细胞即生长至90%融合，此时开始传代。具体方法如下:①将瓶内旧培养基弃去②用 1ml 移液枪头吸取2mlPBS液洗涤培养瓶2次③在瓶内加入2ml 0.25%胰蛋白酶并使其均匀平铺遍布所有细胞表面，静置后于显微镜下可见细胞变圆且细胞间隙增大（图 2）④立即加入培养基 4ml-5ml 中和胰酶终止消化⑤用巴氏吸管反复吹打瓶内细胞，使其形成单细胞悬液⑥之后将混悬液移液到 3 个 75 ㎝2培养瓶中进行体外传代，并分别加入5-7ml左右培养基，放置培养箱中培养（37℃、5%CO2的饱和湿度）。
⑷将含有乳腺癌MDA-MB-231细胞混悬液的培养液用移液枪头吸取至离心管中，打开离心机，设置转速：（1000rpm/min），设定离心时间 5min ，离心完成之后弃上清液，重复加入5mlPBS 再次离心，弃上清液，再加 2mlPBS，反复轻轻吹打，混悬，最终制成 1×107/ml 的乳腺癌细胞悬液，用冰盒保存（过程中离心管口反复酒精灯火焰消毒）。2.2 饲养裸鼠所有实验所用裸鼠均在湖南中医药大学实验楼SPF级实验室饲养，分笼饲养，每笼7只，在人工光照周期下，自由进食和水（图 3），自然喂养1周后依照体重分层，随机数字表法分为补肾组、模型组、空白组、唑来膦酸组、补肾活血高、中、低浓度组、活血组共8 组，每组 7 只。除空白组外，其余组均开始造模。注：造模前各组统一饲养，避免人为分组提前造成选择性偏移。
【参考文献】：
期刊论文
[1]补肾活血方应用于多囊卵巢综合征患者的效果及对生殖激素的影响分析[J]. 徐玉慧. 医学理论与实践. 2018(21)
[2]基于OPG/RANKL/RANK信号通路探究中药对破骨细胞的调控作用[J]. 张楚天,林燕萍. 康复学报. 2018(05)
[3]中医“肾精”的现代医学内涵[J]. 徐德成,马迎民,范吉平. 中医杂志. 2017(22)
[4]中医药治疗乳腺癌进展[J]. 周思颖,张思杰,徐寒子,孙大伟,唐金海. 中国中医基础医学杂志. 2017(10)
[5]逍遥散合二至丸加减治疗乳腺癌内分泌治疗后类更年期综合征临床观察[J]. 赵淑媛,赵常国,杨小霞. 四川中医. 2017(06)
[6]淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ通过AP-1/NFATc1信号通路调控破骨细胞生成[J]. 贺龙刚,高奥,邱煌沛,李文,林晓辉,周丽. 中华中医药杂志. 2017(03)
[7]乳腺癌骨转移过程中的分子机制[J]. 吴玲,王佳,吴英,夏添松. 中国肿瘤外科杂志. 2017(01)
[8]乳腺癌骨转移机制与靶向治疗进展[J]. 鲁光平,殷咏梅,周雪峰,潘骥群,陈进. 现代肿瘤医学. 2017(02)
[9]补肾活血汤对SDF-1α诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响[J]. 杨争,胡金辉,王希,方颖,袁博,陈杏元,刘德果. 时珍国医国药. 2016(08)
[10]中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2015版）[J]. 中国癌症杂志. 2015(09)
博士论文
[1]补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型的影响[D]. 姚暄.北京中医药大学 2009
硕士论文
[1]补肾活血汤对裸鼠乳腺癌骨转移模型和Jagged1/Notch及TGF-β通路蛋白的干预研究[D]. 王贤彬.湖南中医药大学 2018
[2]补肾法对绝经后芳香化酶抑制剂治疗乳腺癌患者雌激素水平的影响[D]. 喻璐.广州中医药大学 2012
本文编号：3486122
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