基于Nrf2/ARE信号通路的一种海洋天然产物的抗氧化作用机制研究
发布时间：2021-12-30 08:49
目的:通过细胞体外实验检测天然化合物N-Me-trichodermamide B（compound 1）对Ha Ca T细胞中核转录因子Nrf2、抗氧化反应元件ARE及其下游Ⅱ相代谢酶HO-1表达的影响,并探索上游通路的活性。方法:首先通过CCK-8方法筛选出低毒性的化合物,采用流式细胞术并进行氧化应激细胞表型的研究,并最终筛选出1种具有抗氧化应激的化合物。然后通过western blot、RT-q PCR、免疫荧光的方法检测细胞内HO-1的表达情况以及细胞内Nrf2表达的影响;并通过western blot、免疫荧光的方法检测Nrf2的入核情况;通过ARE质粒转染,检测ARE荧光素酶活性;通过Nrf2基因沉默实验,瞬时转染小干扰RNA si-Nrf2进入细胞内,转染成功后再次检测Nrf2、ARE、HO-1的活性表达,探索三者间的活性关系;检测磷酸化的蛋白激酶p38的表达水平;通过用p38特异性抑制剂预处理细胞4个小时,随后用待测化额合物作用于细胞,并检测Nrf2、HO-1的表达情况。结果:筛选出的一种结构新型的单体化合物N-Me-trichodermamide B（以compound...
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Nrf2/ARE信号通路作用机制
7种化后物浓度10μM，分别作用于HepG2,HaCaT,PC9三种细胞24小时和48小时，对三种细胞的生存率的影响
入 1mL 的 PBS 重悬细胞、并离心，目的酚红），重复 2 次。L 的 PBS，涡旋仪上轻轻的涡旋，制成单细胞死亡实验aT 细胞经过 6 种无细胞毒性的化合物预处理细胞存活率。与单独加了 H2O2组相比，编诱导的细胞死亡现象，结果具有显著性差合物 40 单独做相同的实验，结果如图 2.2没有毒性作用，并且能够浓度依赖性的减素（SFN）为抗氧化剂，在此实验中以 SFN
【参考文献】：
期刊论文
[1]Discovery of direct inhibitors of Keap1–Nrf2 protein–protein interaction as potential therapeutic and preventive agents[J]. Dhulfiqar Ali Abed,Melanie Goldstein,Haifa Albanyan,Huijuan Jin,Longqin Hu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(04)
本文编号：3557865
【文章来源】：湖南中医药大学湖南省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Nrf2/ARE信号通路作用机制
7种化后物浓度10μM，分别作用于HepG2,HaCaT,PC9三种细胞24小时和48小时，对三种细胞的生存率的影响
入 1mL 的 PBS 重悬细胞、并离心，目的酚红），重复 2 次。L 的 PBS，涡旋仪上轻轻的涡旋，制成单细胞死亡实验aT 细胞经过 6 种无细胞毒性的化合物预处理细胞存活率。与单独加了 H2O2组相比，编诱导的细胞死亡现象，结果具有显著性差合物 40 单独做相同的实验，结果如图 2.2没有毒性作用，并且能够浓度依赖性的减素（SFN）为抗氧化剂，在此实验中以 SFN
【参考文献】：
期刊论文
[1]Discovery of direct inhibitors of Keap1–Nrf2 protein–protein interaction as potential therapeutic and preventive agents[J]. Dhulfiqar Ali Abed,Melanie Goldstein,Haifa Albanyan,Huijuan Jin,Longqin Hu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(04)
本文编号：3557865
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