人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用及其分子机制
发布时间：2022-12-25 09:54
乳腺癌是女性最常被诊断出的恶性肿瘤之一,也是癌症死亡的重要原因。乳腺癌在所有女性癌症病例中约占30%,在所有癌症死亡比例中占14%。与许多国家一样,乳腺癌已成为中国女性中最普遍的癌症,中国新发乳腺癌和死亡病例占世界总数的12.2%和9.6%。目前,手术治疗,放疗和化疗是乳腺癌的主要治疗方法,但有着各种严重的副作用,包括呕吐,恶心,脱发,骨髓抑制和血栓等。因此,有必要为乳腺癌患者开发具有较低副作用的新型抗癌药。人参属植物,作为传统的药用植物,已经受到了广大研究者的关注。人参皂苷是人参属植物的主要有效成分,有着多种生物学功能,如免疫调节、抗菌、抗疲劳、抗肿瘤等功效。人参皂苷Rk1是人参经过处理后生成的一种成分,具有抗胰岛素抵抗,抗炎和抗癌活性。然而,关于人参皂苷Rk1的抗乳腺癌作用的报道却很少。因此,本课题通过一系列的体内外实验来探究人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞的抗增殖作用及其分子机制。1.通过单因素和响应面实验提高了二醇组人参总皂苷中人参皂苷20（S）-Rg3,Rk1和Rg5含量,响应面优化后最佳工艺条件为乙醇浓度91.16%,溶解时间42.31 min,沉淀3次,此时人参皂苷含量为86....
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 研究背景
1.1.1 人参皂苷及其分类
1.1.2 人参皂苷的制备
1.1.3 人参皂苷的分离纯化
1.1.4 人参皂苷的生物学活性
1.1.5 乳腺癌研究现状
1.1.6 抗肿瘤机制研究
1.2 研究方案与内容
1.3 研究目的和创新点
第二章 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.1 引言
2.2 实验材料与仪器
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 人参皂苷单体标准曲线测定
2.3.2 单因素实验
2.3.3 响应面实验
2.3.4 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.3.5 紫外光谱
2.3.6 傅里叶红外光谱
2.3.7 人参皂苷Rk1 纯度测定
2.4 实验结果及讨论
2.4.1 人参皂苷单体标准曲线
2.4.2 单因素实验结果分析
2.4.3 响应面实验结果分析
2.4.4 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.4.5 人参皂苷Rk1 紫外光谱分析
2.4.6 人参皂苷Rk1 傅里叶红外光谱分析
2.5 本章小结
第三章 人参皂苷Rk1对不同肿瘤细胞的抗增殖作用
3.1 引言
3.2 实验仪器与试剂
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验所用细胞株
3.2.4 相关实验试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 CCK-8细胞毒性实验
3.3.3 LDH释放测定
3.3.4 乳腺癌细胞的克隆形成实验
3.4 结果与讨论
3.4.1 人参皂苷Rk1 对不同肿瘤细胞的抗增殖作用
3.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞的抑制作用
3.4.3 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞LDH释放的影响
3.4.4 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞克隆形成的影响
3.5 本章小结
第四章 人参皂苷Rk1体内抗乳腺癌研究
4.1 引言
4.2 实验试剂与仪器
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验细胞株
4.2.4 实验动物
4.2.5 相关实验试剂及药物的配制
4.3 实验方法
4.3.1 MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞的前期准备
4.3.2 乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231 荷瘤裸鼠模型构建
4.3.3 乳腺癌荷瘤裸鼠分组及腹腔注射给药
4.3.4 相关指标观察及检测
4.4 结果与讨论
4.4.1 乳腺癌荷瘤裸鼠的一般情况观察
4.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠体重的影响
4.4.3 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤体积的影响
4.4.4 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的瘤重的影响
4.4.5 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤组织学的影响
4.4.6 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠主要器官组织学的影响
4.4.7 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠肝肾功能的影响
4.5 本章小结
第五章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞周期分布的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验细胞株
5.2.4 相关实验试剂的配制
5.3 实验方法
5.3.1 细胞培养
5.3.2 细胞周期分布检测
5.3.3 蛋白质免疫印迹
5.4 结果与讨论
5.4.1 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞周期分布影响
5.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞周期相关蛋白的影响
5.5 本章小结
第六章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞凋亡的影响
6.1 引言
6.2 实验材料与仪器
6.2.1 实验材料
6.2.2 实验仪器
6.2.3 实验细胞株
6.2.4 实验试剂的配制
6.3 实验方法
6.3.1 Hoechst33342 荧光染色
6.3.2 Annexin V/PI双染
6.3.3 JC-10 线粒体膜电位检测
6.3.4 实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)
6.3.5 蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白
6.3.6 免疫印迹检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白
6.3.7 免疫组化检测肿瘤中凋亡蛋白的表达
6.4 结果与讨论
6.4.1 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞Hoechst33342 染色的影响
6.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞Annexin V/PI双染色的影响
6.4.3 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞线粒体膜电位的影响
6.4.4 qRT-PCR实验结果分析
6.4.5 乳腺癌细胞凋亡相关蛋白免疫印迹结果分析
6.4.6 肿瘤组织凋亡相关蛋白检测结果分析
6.4.7 Z-VAD-FMK对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
6.5 本章小结
第七章 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞ROS/PI3K/Akt通路的影响
7.1 引言
7.2 实验材料与仪器
7.2.1 实验材料
7.2.2 实验仪器及设备
7.2.3 实验细胞株
7.2.4 实验试剂的配制
7.3 实验方法
7.3.1 ROS的检测
7.3.2 乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路蛋白免疫印迹检测
7.3.3 荷瘤裸鼠肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白免疫印迹检测
7.3.4 荷瘤裸鼠肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白免疫组化分析
7.4 结果与讨论
7.4.1 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞ROS的影响
7.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响
7.4.3 肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白检测结果分析
7.4.4 LY294002 对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.4.5 胰岛素对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.4.6 NAC对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.5 本章小结
第八章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞有氧糖酵解影响初探
8.1 引言
8.2 实验材料与仪器
8.2.1 实验材料
8.2.2 实验仪器及设备
8.2.3 实验细胞株
8.2.4 实验试剂的配制
8.3 实验方法
8.3.1 乳腺癌细胞葡萄糖摄取的测定
8.3.2 乳腺癌细胞乳酸产生的测定
8.3.3 乳腺癌细胞ATP含量的测定
8.3.4 乳腺癌细胞HK2 表达的测定
8.3.5 乳腺癌细胞PKM2 表达的测定
8.3.6 乳腺癌细胞LDHA表达的测定
8.3.7 乳腺癌细胞蛋白免疫印迹
8.3.8 肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫印迹分析
8.3.9 肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫组化分析
8.4 结果与讨论
8.4.1 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞葡萄糖摄取、乳酸产生以及ATP含量的影响
8.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞HK2、PKM2、LDHA表达的影响
8.4.3 人参皂苷Rk1 对肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA表达的影响
8.5 本章小结
总结与展望
参考文献
攻读博士学位期间主要科研成果
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]早期乳腺癌的手术治疗及临床预后分析[J]. 黄丽英,陈夏. 中国卫生标准管理. 2018(24)
[2]人参皂苷Rg1对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡、侵袭和迁移的影响[J]. 席婕,刘晖. 临床误诊误治. 2018(12)
[3]六种人参皂苷的制备及体外抗氧化活性研究[J]. 张馨妍,洪新悦,高连丛,马莹慧,韩柳. 世界最新医学信息文摘. 2018(A2)
[4]中西医护理对乳腺癌患者术后放疗不良反应的影响[J]. 刘佳. 中国继续医学教育. 2018(34)
[5]护理干预对乳腺癌患者使用盐酸多柔比星脂质体滴注反应的影响[J]. 王亚芳. 实用临床护理学电子杂志. 2018(49)
[6]银椴苷抑制人胰腺癌细胞增殖的作用及机制研究[J]. 仲维兰,刘红,鲁美钰,范瑶瑶,梁晓琳,张涵,卢法荣,徐茂磊,周玲. 中国药理学通报. 2018(12)
[7]联用来曲唑、紫杉醇、顺铂对转移性乳腺癌患者进行化疗的效果研析[J]. 马玲. 当代医药论丛. 2018(22)
[8]柠檬酸水解法获得稀有人参皂苷工艺的优化[J]. 杨烁,刘一桐,佘欣鑫,王昆,赵婷,徐蕾,刘文丛. 吉林农业大学学报. 2018(05)
[9]盐酸水解人参总皂苷制备20（R）-人参皂苷Rg[J]. 梁志齐,张京楼,金海珠,成乐琴. 人参研究. 2018(04)
[10]人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞分化的影响[J]. 张凤兰,杨璐军,胡炜彦,周姣月,马生霞,肖志成. 中国组织工程研究. 2018(13)
博士论文
[1]人参皂苷Rb1对小鼠肠缺血再灌注致急性肾损伤保护作用中的分子机制研究[D]. 孙倩.武汉大学 2014
[2]地肤子皂苷对HepG2人肝癌细胞凋亡和迁移侵袭的影响及其作用机制研究[D]. 王静.西北农林科技大学 2014
[3]人参皂苷降解及其产物化学成分的研究[D]. 李绪文.吉林大学 2006
硕士论文
[1]碱降解人参茎叶三醇组皂苷工艺的研究及产物的结构修饰[D]. 程磊.吉林大学 2013
[2]高速逆流色谱提取人参皂苷的研究[D]. 曾鹏涛.长春工业大学 2012
[3]人参皂苷Rg3和Rh2的分离制备研究[D]. 孙峰.延边大学 2009
[4]人参皂苷Rg3的抗疲劳作用研究[D]. 张艳.吉林大学 2007
本文编号：3726388
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 研究背景
1.1.1 人参皂苷及其分类
1.1.2 人参皂苷的制备
1.1.3 人参皂苷的分离纯化
1.1.4 人参皂苷的生物学活性
1.1.5 乳腺癌研究现状
1.1.6 抗肿瘤机制研究
1.2 研究方案与内容
1.3 研究目的和创新点
第二章 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.1 引言
2.2 实验材料与仪器
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 人参皂苷单体标准曲线测定
2.3.2 单因素实验
2.3.3 响应面实验
2.3.4 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.3.5 紫外光谱
2.3.6 傅里叶红外光谱
2.3.7 人参皂苷Rk1 纯度测定
2.4 实验结果及讨论
2.4.1 人参皂苷单体标准曲线
2.4.2 单因素实验结果分析
2.4.3 响应面实验结果分析
2.4.4 二醇组人参总皂苷的分离纯化
2.4.5 人参皂苷Rk1 紫外光谱分析
2.4.6 人参皂苷Rk1 傅里叶红外光谱分析
2.5 本章小结
第三章 人参皂苷Rk1对不同肿瘤细胞的抗增殖作用
3.1 引言
3.2 实验仪器与试剂
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验所用细胞株
3.2.4 相关实验试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 CCK-8细胞毒性实验
3.3.3 LDH释放测定
3.3.4 乳腺癌细胞的克隆形成实验
3.4 结果与讨论
3.4.1 人参皂苷Rk1 对不同肿瘤细胞的抗增殖作用
3.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞的抑制作用
3.4.3 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞LDH释放的影响
3.4.4 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞克隆形成的影响
3.5 本章小结
第四章 人参皂苷Rk1体内抗乳腺癌研究
4.1 引言
4.2 实验试剂与仪器
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验细胞株
4.2.4 实验动物
4.2.5 相关实验试剂及药物的配制
4.3 实验方法
4.3.1 MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞的前期准备
4.3.2 乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231 荷瘤裸鼠模型构建
4.3.3 乳腺癌荷瘤裸鼠分组及腹腔注射给药
4.3.4 相关指标观察及检测
4.4 结果与讨论
4.4.1 乳腺癌荷瘤裸鼠的一般情况观察
4.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠体重的影响
4.4.3 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤体积的影响
4.4.4 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的瘤重的影响
4.4.5 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤组织学的影响
4.4.6 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠主要器官组织学的影响
4.4.7 人参皂苷Rk1 对乳腺癌荷瘤裸鼠肝肾功能的影响
4.5 本章小结
第五章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞周期分布的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验细胞株
5.2.4 相关实验试剂的配制
5.3 实验方法
5.3.1 细胞培养
5.3.2 细胞周期分布检测
5.3.3 蛋白质免疫印迹
5.4 结果与讨论
5.4.1 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞周期分布影响
5.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞周期相关蛋白的影响
5.5 本章小结
第六章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞凋亡的影响
6.1 引言
6.2 实验材料与仪器
6.2.1 实验材料
6.2.2 实验仪器
6.2.3 实验细胞株
6.2.4 实验试剂的配制
6.3 实验方法
6.3.1 Hoechst33342 荧光染色
6.3.2 Annexin V/PI双染
6.3.3 JC-10 线粒体膜电位检测
6.3.4 实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)
6.3.5 蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白
6.3.6 免疫印迹检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白
6.3.7 免疫组化检测肿瘤中凋亡蛋白的表达
6.4 结果与讨论
6.4.1 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞Hoechst33342 染色的影响
6.4.2 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞Annexin V/PI双染色的影响
6.4.3 人参皂苷Rk1对MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌细胞线粒体膜电位的影响
6.4.4 qRT-PCR实验结果分析
6.4.5 乳腺癌细胞凋亡相关蛋白免疫印迹结果分析
6.4.6 肿瘤组织凋亡相关蛋白检测结果分析
6.4.7 Z-VAD-FMK对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
6.5 本章小结
第七章 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞ROS/PI3K/Akt通路的影响
7.1 引言
7.2 实验材料与仪器
7.2.1 实验材料
7.2.2 实验仪器及设备
7.2.3 实验细胞株
7.2.4 实验试剂的配制
7.3 实验方法
7.3.1 ROS的检测
7.3.2 乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路蛋白免疫印迹检测
7.3.3 荷瘤裸鼠肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白免疫印迹检测
7.3.4 荷瘤裸鼠肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白免疫组化分析
7.4 结果与讨论
7.4.1 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞ROS的影响
7.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响
7.4.3 肿瘤组织PI3K/Akt信号通路蛋白检测结果分析
7.4.4 LY294002 对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.4.5 胰岛素对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.4.6 NAC对人参皂苷Rk1 诱导乳腺癌细胞凋亡的影响
7.5 本章小结
第八章 人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞有氧糖酵解影响初探
8.1 引言
8.2 实验材料与仪器
8.2.1 实验材料
8.2.2 实验仪器及设备
8.2.3 实验细胞株
8.2.4 实验试剂的配制
8.3 实验方法
8.3.1 乳腺癌细胞葡萄糖摄取的测定
8.3.2 乳腺癌细胞乳酸产生的测定
8.3.3 乳腺癌细胞ATP含量的测定
8.3.4 乳腺癌细胞HK2 表达的测定
8.3.5 乳腺癌细胞PKM2 表达的测定
8.3.6 乳腺癌细胞LDHA表达的测定
8.3.7 乳腺癌细胞蛋白免疫印迹
8.3.8 肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫印迹分析
8.3.9 肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫组化分析
8.4 结果与讨论
8.4.1 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞葡萄糖摄取、乳酸产生以及ATP含量的影响
8.4.2 人参皂苷Rk1 对乳腺癌细胞HK2、PKM2、LDHA表达的影响
8.4.3 人参皂苷Rk1 对肿瘤组织HK2、PKM2、LDHA表达的影响
8.5 本章小结
总结与展望
参考文献
攻读博士学位期间主要科研成果
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]早期乳腺癌的手术治疗及临床预后分析[J]. 黄丽英,陈夏. 中国卫生标准管理. 2018(24)
[2]人参皂苷Rg1对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡、侵袭和迁移的影响[J]. 席婕,刘晖. 临床误诊误治. 2018(12)
[3]六种人参皂苷的制备及体外抗氧化活性研究[J]. 张馨妍,洪新悦,高连丛,马莹慧,韩柳. 世界最新医学信息文摘. 2018(A2)
[4]中西医护理对乳腺癌患者术后放疗不良反应的影响[J]. 刘佳. 中国继续医学教育. 2018(34)
[5]护理干预对乳腺癌患者使用盐酸多柔比星脂质体滴注反应的影响[J]. 王亚芳. 实用临床护理学电子杂志. 2018(49)
[6]银椴苷抑制人胰腺癌细胞增殖的作用及机制研究[J]. 仲维兰,刘红,鲁美钰,范瑶瑶,梁晓琳,张涵,卢法荣,徐茂磊,周玲. 中国药理学通报. 2018(12)
[7]联用来曲唑、紫杉醇、顺铂对转移性乳腺癌患者进行化疗的效果研析[J]. 马玲. 当代医药论丛. 2018(22)
[8]柠檬酸水解法获得稀有人参皂苷工艺的优化[J]. 杨烁,刘一桐,佘欣鑫,王昆,赵婷,徐蕾,刘文丛. 吉林农业大学学报. 2018(05)
[9]盐酸水解人参总皂苷制备20（R）-人参皂苷Rg[J]. 梁志齐,张京楼,金海珠,成乐琴. 人参研究. 2018(04)
[10]人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞分化的影响[J]. 张凤兰,杨璐军,胡炜彦,周姣月,马生霞,肖志成. 中国组织工程研究. 2018(13)
博士论文
[1]人参皂苷Rb1对小鼠肠缺血再灌注致急性肾损伤保护作用中的分子机制研究[D]. 孙倩.武汉大学 2014
[2]地肤子皂苷对HepG2人肝癌细胞凋亡和迁移侵袭的影响及其作用机制研究[D]. 王静.西北农林科技大学 2014
[3]人参皂苷降解及其产物化学成分的研究[D]. 李绪文.吉林大学 2006
硕士论文
[1]碱降解人参茎叶三醇组皂苷工艺的研究及产物的结构修饰[D]. 程磊.吉林大学 2013
[2]高速逆流色谱提取人参皂苷的研究[D]. 曾鹏涛.长春工业大学 2012
[3]人参皂苷Rg3和Rh2的分离制备研究[D]. 孙峰.延边大学 2009
[4]人参皂苷Rg3的抗疲劳作用研究[D]. 张艳.吉林大学 2007
本文编号：3726388
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