辅助降糖片体外降糖作用机制研究及其化学成分分析

发布时间：2023-01-15 18:18

　　目的:探讨辅助降糖片改善细胞胰岛素抵抗可能的作用机制,鉴定辅助降糖片的化学成分,利用网络药理学预测其改善胰岛素抵抗的相关作用靶点,为辅助降糖片改善胰岛素抵抗提供科学依据。方法:高分辨液质联用方法对辅助降糖片进行初步化学成分分析;网络药理学预测其可能的降糖作用靶点;高浓度胰岛素诱导HepG2细胞、棕榈酸诱导C2C12使其产生胰岛素抵抗,CCK-8法检测辅助降糖片对HepG2细胞、C2C12细胞活性的影响筛选合适的药物浓度并用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法（GOD-POD法）测定各组HepG2细胞、C2C12细胞的葡萄糖消耗量;Annexin V-FITC/PI双染法,检测造模方法和辅助降糖片对HepG2细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号转导通路中InsRβTyr1135/1136、PI3Kp85等mRNA的表达;Western Blot法检测该通路中InsRβTyr1135/1136、IRS1、等关键蛋白在HepG2细胞、C2C12细胞中的表达水平。结果:1.辅助降糖片化学成分分析:通过对比化合物对照品的的质谱裂解规律和结合参考文献及数据库质谱裂解信息,本实验快速... 

【文章页数】：114 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 辅助降糖片概述
        1.1.1 辅助降糖片概述
        1.1.2 组方中各味药材化学成分及降糖作用研究概况
        1.1.3 小结
        参考文献
    1.2 中医药干预PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗研究进展
        1.2.1 PI3K/AKT信号通路与胰岛素抵抗的关系
        1.2.2 PI3K/AKT信号通路在中药复方干预2型糖尿病IR作用中的应用
        1.2.3 PI3K/AKT信号通路在中药提取物及单体干预2型糖尿病IR作用中的应用
        1.2.4 小结
        参考文献
前言
第二章 辅助降糖片化学成分研究
    2.1 仪器和材料
        2.1.1 仪器
        2.1.2 材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 溶液的配置
        2.2.2 检测条件
    2.3 实验结果
        2.3.1 黄酮类化合物的结构鉴定
        2.3.2 黄酮苷类化合物的结构鉴定
        2.3.3 皂苷类化合物的结构鉴定
        2.3.4 酚酸类化合物的结构鉴定
        2.3.5 其他类化合物的结构鉴定
    2.4 本章小结
    2.5 讨论
第三章 基于网络药理学的辅助降糖片靶点预测
    3.1 实验方法
    3.2 实验结果
    3.3 本章小结
    3.4 讨论
第四章 辅助降糖片改善肝细胞胰岛素抵抗作用的研究
    4.1 仪器和材料
        4.1.1 仪器
        4.1.2 试剂与材料
        4.1.3 实验细胞
    4.2 实验方法
        4.2.1 试剂配制
        4.2.2 细胞培养
        4.2.3 HepG2细胞标准曲线的制作
        4.2.4 辅助降糖片对HepG2细胞存活率的影响
        4.2.5 辅助降糖片对HepG2葡萄糖消耗量的影响
        4.2.6 Annexin V-FITC/PI双染检测辅助降糖片对HepG2细胞凋亡的影响
        4.2.7 实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号通路靶点基因的表达
        4.2.8 Western Blot测定HepG2细胞胰岛素信号通路靶点蛋白的表达
        4.2.9 数据分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 HepG2细胞标准曲线的制作
        4.3.2 辅助降糖片对HepG2细胞存活率的影响
        4.3.3 辅助降糖片对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响
        4.3.4 各组HepG2细胞凋亡检测的结果
        4.3.5 辅助降糖片对各组HepG2细胞胰岛素信号靶点关键基因表达的影响
        4.3.6 辅助降糖片对各组HepG2细胞胰岛素信号通路靶蛋白表达的影响
    4.4 本章小结
    4.5 讨论
第五章 辅助降糖片改善肌细胞胰岛素抵抗作用的研究
    5.1 仪器和材料
        5.1.1 仪器
        5.1.2 试剂与材料
        5.1.3 实验细胞
    5.2 实验方法
        5.2.1 实验药物的配置
        5.2.2 C2C12细胞培养
        5.2.3 C2C12细胞分化
        5.2.4 辅助降糖片对C2C12细胞存活率的影响
        5.2.5 辅助降糖片对胰岛素抵抗的C2C12细胞葡萄糖消耗的影响
        5.2.6 Western Blot测定C2C12细胞胰岛素信号通路靶点蛋白的表达
        5.2.7 数据分析方法
    5.3 实验结果
        5.3.1 C2C12细胞形态变化
        5.3.2 辅助降糖片对C2C12细胞存活率的影响
        5.3.3 辅助降糖片对C2C12细胞葡萄糖消耗的影响
        5.3.4 各组C2C12细胞胰岛素信号通路靶点蛋白表达的结果
    5.4 本章小结
    5.5 讨论
结语
创新点与特色
不足与展望
参考文献
附图
致谢
在学期间主要研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于UPLC-Q-Orbitrap MS法分析补肺益肾方的化学成分[J]. 黄海英,康俊丽,余亚辉,赵鹏,冯素香,杜燕,李建生.  分析测试学报. 2019(01)
[2]UPLC-Q-TOF-MS/MS分析复方南星止痛膏化学成分[J]. 李郭帅,马阳,耿婷,高霞,黄文哲,曹亮,肖伟,王振中.  中国中药杂志. 2019(02)
[3]中医药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的机制研究进展[J]. 孙丰卉,王秋虹,邱宗林,王泽,林兰.  医学综述. 2018(20)
[4]基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS的红禾麻提取物化学成分分析[J]. 唐娟,吴耽,陈思颖,李莹,李靖,巩仔鹏,李维维,兰燕宇,王永林.  中国实验方剂学杂志. 2018(24)
[5]桑叶化学成分及生物活性研究进展[J]. 王婷婷,马天宇,李琪,李蒙.  食品与药品. 2018(05)
[6]肉桂的化学成分、药理活性及临床应用研究进展[J]. 林红强,周柏松,谭静,王涵,吴福林,刘金平,李平亚.  特产研究. 2018(02)
[7]大狼把草的化学成分液质联用快速鉴定分析[J]. 王翌臣,王焕军,张玲,周洪雷,马艳妮.  中国实验方剂学杂志. 2018(17)
[8]肝糖异方通过上调肝脏IRS2/PI3K信号通路改善肝硬化大鼠的胰岛素抵抗[J]. 陈冻伢,熊静芳,徐燕芳,冯慧,徐建军,徐虹.  中华中医药学刊. 2018(04)
[9]匙羹藤总皂苷通过调控脂肪组织PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗的作用机制研究[J]. 秦灵灵,穆晓红,徐暾海,刘铜华.  世界科学技术-中医药现代化. 2017(12)
[10]和于泰辅助降糖片联合二甲双胍对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响[J]. 许光远,孙文,宋紫临,郭璇,吴丽丽,秦灵灵,侯丹,张茁,田硕,李响,刘铜华.  中国中医药信息杂志. 2017(11)

博士论文
[1]辅助降糖颗粒与二甲双胍联合用药对ZDF大鼠胰岛素抵抗的作用及机制研究[D]. 许光远.北京中医药大学 2017
[2]辅助降糖颗粒与吡格列酮联合用药对KKAy小鼠肝脏胰岛素抵抗及机制研究[D]. 王海焱.北京中医药大学 2017
[3]卫矛抗炎物质基础及其质量控制研究[D]. 王腾华.广州中医药大学 2016
[4]基于液质联用技术的大小蓟多组分分析与黄酮类成分的药物代谢动力学研究[D]. 孙倩.河北医科大学 2013

硕士论文
[1]尖叶假龙胆乙酸乙酯部位改善胰岛素抵抗作用机制研究及成分分析[D]. 高佳琪.北京中医药大学 2018
[2]芙朴感冒颗粒活性成分的液质联用分析及其抗炎活性评价[D]. 徐米米.浙江大学 2018
[3]基于LC-HR-MSn的糖痹康颗粒成分分析及芍药内酯苷对高糖诱导雪旺细胞氧化应激损伤保护作用研究[D]. 王东超.北京中医药大学 2017
[4]锦南复方改善2型糖尿病模型大鼠胰岛素抵抗及机制初探[D]. 尹忞强.扬州大学 2016
[5]黄酮醇类化合物ESI-ITMSn质谱裂解规律的量子化学研究[D]. 李想.佳木斯大学 2015
[6]蜂蜜酚类化合物的色谱分析及其电喷雾质谱裂解途径的研究[D]. 梁艳.西北大学 2009



本文编号：3731348