红波罗花碱A的神经保护作用及其作用机制研究
发布时间：2023-05-04 01:43
红波罗花碱A(Delavatine A)是一种从紫葳科角蒿属植物红波罗花(Incarvillea delavayi)中分离的含有异喹啉并环烷新型骨架的生物碱类化合物。经课题组前期的活性筛选发现,Delavatine A对颅脑创伤造成的星形胶质细胞过度活化具有抑制作用,对肿瘤细胞的增值也具有一定的抑制作用。目前尚未有其它活性的报道。缺血性脑卒中是由于脑部血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起的脑组织损伤的急性脑血管疾病,其发病机制复杂,兴奋性神经毒性作用、神经炎症、能量代谢障碍、半暗带去极化及细胞凋亡等都共同参与了缺血性脑卒中的病理变化过程。考虑到Delavatine A在前期筛选中表现出的可能的神经保护作用,我们在本课题中对Delavatine A在谷氨酸诱导的神经细胞损伤、LPS诱导的小胶质细胞活化方面进行了体外神经保护作用研究,并对Delavatine A在大鼠缺血再灌注损伤模型的保护作用进行了研究。1.神经保护作用的细胞筛选。首先在多个细胞水平,采用谷氨酸损伤模型,考察Delavatine A对细胞存活率、LDH释放、细胞形态、细胞凋亡以及凋亡蛋白的影响。分别采用CCK-8法、LDH...
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词英汉注释表
第一章 绪论
1.1 兴奋性神经毒性理论
1.2 神经炎症反应
1.3 NF-ΚB信号通路
1.4 本课题的立题依据和研究意义
第二章 Delavatine A抑制兴奋性神经毒性的研究
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 实验细胞株
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Delavatine A对PC12、SH-SY5Y细胞的细胞毒作用
2.2.3 Delavatine A对Glu损伤神经细胞的保护作用
2.2.4 Delavatine A对Glu引起的兴奋性神经毒性中钙稳态的影响
2.2.5 Delavatine A对Glu引起的兴奋性神经毒性中氧化应激反应的影响.
2.3 统计分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 Delavatine A对PC12、SH-SY5Y细胞的细胞毒作用
2.4.2 Delavatine A对Glu损伤PC12、SH-SY5Y细胞的保护作用
2.4.3 Delavatine A减少Glu损伤细胞LDH的释放
2.4.4 荧光显微镜观察Delavatine A对Glu损伤PC12细胞的保护作用
2.4.5 Delavatine A降低Glu损伤PC12细胞的凋亡率
2.4.6 Delavatine A调控凋亡相关蛋白的表达
2.4.7 Delavatine A减少Ca2+内流以维持细胞内钙稳态
2.4.8 Delavatine A维持PC12细胞线粒体膜电位正常
2.4.9 Delavatine A不具备体外化学还原性
2.4.10 Delavatine A减少细胞内ROS的产生
2.4.11 Delavatine A增强细胞内GSH和SOD的活力
2.5 本章小结
第三章 Delavatine A 对LPS诱导的小胶质细胞的神经炎症作用研究
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验细胞株
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 Delavatine A作用于BV-2细胞的适宜浓度范围
3.2.3 Delavatine A对BV-2细胞NO分泌的影响
3.2.4 ELISA法检测Delavatine A对上清液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影响
3.2.5 RT-PCR检测Delavatine A对细胞TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的影响
3.2.6 Delavatine A对炎症相关通路蛋白的影响
3.3 统计分析
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 Delavatine A作用于BV-2细胞的适宜浓度范围
3.4.2 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞NO的分泌
3.4.3 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞炎症因子的分泌
3.4.4 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞炎症因子的mRNA水平
3.4.5 Delavatine A通过下调iNOS、COX-2的表达以减少NO的分泌
3.4.6 Delavatine A通过影响NF-κB信号通路IκBα和p65蛋白以调控炎症因子的表达
3.5 本章小结
第四章 Delavatine A治疗缺血性脑卒中的作用研究
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 实验动物
4.1.2 实验用具及耗材
4.1.3 实验试剂
4.2 实验方法
4.2.1 Delavatine A作用于SD大鼠的适宜浓度范围
4.2.2 实验分组与给药方案
4.2.3 大鼠MCAO模型的制备
4.2.4 神经行为学评分
4.2.5 TTC法染色
4.3 统计分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 Delavatine A作用于SD大鼠的适宜浓度范围
4.4.2 Delavatine A改善大鼠脑缺血再灌注后的神经行为学评分
4.4.3 Delavatine A改善大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死体积
4.5 本章小结
第五章 总结与展望
5.1 主要研究成果
5.2 研究创新点
5.3 工作展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
本文编号：3807696
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词英汉注释表
第一章 绪论
1.1 兴奋性神经毒性理论
1.2 神经炎症反应
1.3 NF-ΚB信号通路
1.4 本课题的立题依据和研究意义
第二章 Delavatine A抑制兴奋性神经毒性的研究
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 实验细胞株
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Delavatine A对PC12、SH-SY5Y细胞的细胞毒作用
2.2.3 Delavatine A对Glu损伤神经细胞的保护作用
2.2.4 Delavatine A对Glu引起的兴奋性神经毒性中钙稳态的影响
2.2.5 Delavatine A对Glu引起的兴奋性神经毒性中氧化应激反应的影响.
2.3 统计分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 Delavatine A对PC12、SH-SY5Y细胞的细胞毒作用
2.4.2 Delavatine A对Glu损伤PC12、SH-SY5Y细胞的保护作用
2.4.3 Delavatine A减少Glu损伤细胞LDH的释放
2.4.4 荧光显微镜观察Delavatine A对Glu损伤PC12细胞的保护作用
2.4.5 Delavatine A降低Glu损伤PC12细胞的凋亡率
2.4.6 Delavatine A调控凋亡相关蛋白的表达
2.4.7 Delavatine A减少Ca2+内流以维持细胞内钙稳态
2.4.8 Delavatine A维持PC12细胞线粒体膜电位正常
2.4.9 Delavatine A不具备体外化学还原性
2.4.10 Delavatine A减少细胞内ROS的产生
2.4.11 Delavatine A增强细胞内GSH和SOD的活力
2.5 本章小结
第三章 Delavatine A 对LPS诱导的小胶质细胞的神经炎症作用研究
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 实验细胞株
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 Delavatine A作用于BV-2细胞的适宜浓度范围
3.2.3 Delavatine A对BV-2细胞NO分泌的影响
3.2.4 ELISA法检测Delavatine A对上清液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的影响
3.2.5 RT-PCR检测Delavatine A对细胞TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的影响
3.2.6 Delavatine A对炎症相关通路蛋白的影响
3.3 统计分析
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 Delavatine A作用于BV-2细胞的适宜浓度范围
3.4.2 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞NO的分泌
3.4.3 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞炎症因子的分泌
3.4.4 Delavatine A减少LPS刺激下小胶质细胞炎症因子的mRNA水平
3.4.5 Delavatine A通过下调iNOS、COX-2的表达以减少NO的分泌
3.4.6 Delavatine A通过影响NF-κB信号通路IκBα和p65蛋白以调控炎症因子的表达
3.5 本章小结
第四章 Delavatine A治疗缺血性脑卒中的作用研究
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 实验动物
4.1.2 实验用具及耗材
4.1.3 实验试剂
4.2 实验方法
4.2.1 Delavatine A作用于SD大鼠的适宜浓度范围
4.2.2 实验分组与给药方案
4.2.3 大鼠MCAO模型的制备
4.2.4 神经行为学评分
4.2.5 TTC法染色
4.3 统计分析
4.4 实验结果与讨论
4.4.1 Delavatine A作用于SD大鼠的适宜浓度范围
4.4.2 Delavatine A改善大鼠脑缺血再灌注后的神经行为学评分
4.4.3 Delavatine A改善大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死体积
4.5 本章小结
第五章 总结与展望
5.1 主要研究成果
5.2 研究创新点
5.3 工作展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
本文编号：3807696
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3807696.html
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