何首乌肝毒性物质基础及质量控制研究

发布时间：2023-05-07 00:38

　　何首乌为我国传统中药,近年来有关其肝毒性报道日益增多,为减少药物毒副作用,确保临床用药安全,本论文以何首乌为研究对象,通过免疫应激模型从体内体外试验探究其主要毒性物质基础、建立各部位指纹图谱明确质量控制标准要求。主要研究内容如下:1.何首乌肝毒性部位的筛选目的:明确何首乌肝毒性主要部位方法:通过LPS建立细胞免疫应激模型,MTT检测不同部位药材(生品、炮制品、水洗部位、50%乙醇部位、95%乙醇部位)对L-02细胞(正常人肝细胞)的抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡、ELISA试剂盒检测培养液上清中ALT、AST含量;采用LPS建立免疫应激大鼠动物模型,试验分为18组,以灌胃的方式给予不同剂量药物,观察肝脏指数、血清中ALT、AST、LDH释放率、肝脏病理学改变。结果:在此模型下,体外试验表明当浓度为400μg·mL-1时,50%乙醇部位细胞抑制率、凋亡率、细胞上清液ALT、AST含量都最高;体内动物试验中50%乙醇部位能显著增加大鼠肝脏指数、提高血清中ALT、AST、LDH释放率、肝脏有病理学改变。结论:结合体内体外试验,在免疫应激模型下,诱导何首乌肝毒性的部位为50%乙醇部位。2.何首...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
第一章 何首乌肝毒性部位筛选研究
    1 试验材料
        1.1 试验细胞
        1.2 试验动物
        1.3 材料
        1.4 试剂与药品
        1.5 主要仪器
    2 试验方法
        2.1 何首乌不同提取部位药材的制备
        2.2 何首乌不同提取部位药材体外肝毒性筛选
            2.2.1 MTT 工作液配制
            2.2.2 人正常肝脏L-02细胞的培养
            2.2.3 细胞计数
            2.2.4 细胞形态学观察
            2.2.5 不同提取部位药材对LPS诱导L-02细胞毒性的影响
            2.2.6 不同提取部位药材对LPS诱导L-02细胞凋亡的影响
            2.2.7 不同提取部位药材对LPS诱导L-02细胞AST、ALT释放水平的影响
        2.3 何首乌不同提取部位药材体内肝毒性筛选
            2.3.1 动物分组与给药
            2.3.2 不同提取部位药材对大鼠肝脏指数的影响
            2.3.3 不同提取部位药材对大鼠血清ALT、AST、LDH的影响
            2.3.4 肝脏病理学切片
        2.4 统计学处理
    3 结果
        3.1 细胞形态观察
        3.2 不同提取部位药材对LPS诱导L-02细胞毒性的影响
        3.3 不同提取部位药材对LPS诱导L02细胞凋亡的影响
        3.4 不同提取部位药材对LPS诱导L-02细胞AST、ALT释放水平的影响
        3.5 不同提取部位药材对大鼠肝脏指数的影响
        3.6 不同提取部位药材对大鼠血清ALT、AST、LDH的影响
        3.7 肝脏病理学切片
    4 讨论
第二章 何首乌肝毒性物质基础的验证
    1 试验材料
        1.1 试验细胞
        1.2 试验动物
        1.3 材料
        1.4 试剂与药品
        1.5 主要仪器
    2 方法
        2.1 二苯乙烯苷的富集
            2.1.1 提取
            2.1.2 分离
            2.1.3 晶体结构解析
        2.2 TSG单体体外细胞毒性验证
            2.2.1 药物配置
            2.2.2 细胞形态学观察
            2.2.3 不同浓度TSG单体对LPS诱导L-02细胞毒性的影响
            2.2.4 不同浓度TSG单体对LPS诱导L-02细胞凋亡的影响
            2.2.5 不同浓度TSG单体对LPS诱导L-02细胞AST、ALT释放水平的影响
        2.3 TSG单体体内肝毒性验证
            2.3.1 动物分组与给药
            2.3.2 不同浓度TSG单体对大鼠肝脏指数的影响
            2.3.3 不同浓度TSG单体对大鼠血清ALT、AST、LDH的影响
            2.3.4 肝脏病理学切片
        2.4 统计学处理
    3 结果
        3.1 晶体验证
        3.2 细胞形态观察
        3.3 不同浓度TSG单体对LPS诱导L-02细胞毒性的影响
        3.4 不同浓度TSG单体对LPS诱导L02细胞凋亡的影响
        3.5 不同浓度TSG单体对LPS诱导L-02细胞AST、ALT释放水平的影响
        3.6 不同浓度TSG单体对大鼠肝脏指数的影响
        3.7 不同浓度TSG单体对大鼠血清ALT、AST、LDH的影响
        3.8 肝脏病理学切片
    4 讨论
第三章 何首乌质量控制研究
    1 试验材料
        1.1 试剂与药品
        1.2 主要仪器
        1.3 材料
    2 方法
        2.1 不同产地何首乌50%乙醇部位指纹图谱研究
            2.1.1 样品前处理
            2.1.2 色谱条件
            2.1.3 对照品溶液的制备
            2.1.4 供试品溶液的制备
            2.1.5 线性关系考察
            2.1.6 方法学考察
            2.1.7 TSG含量测定
            2.1.8 何首乌指纹图谱相似度评价
        2.2 不同产地何首乌95%乙醇部位指纹图谱研究
            2.2.1 样品的前处理
            2.2.2 色谱条件
            2.2.3 对照品溶液的制备
            2.2.4 供试品溶液的制备
            2.2.5 线性关系考察
            2.2.6 方法学考察
            2.2.7 大黄素和大黄素甲醚含量测定
            2.2.8 何首乌指纹图谱相似度评价
    3 结果
        3.1 不同产地何首乌50%乙醇部位指纹图谱研究
            3.1.1 含量测定
            3.1.2 参照峰的选择
            3.1.3 指纹图谱的建立及共有峰的标定
            3.1.4 相似度计算
            3.1.5 聚类分析
            3.1.6 主成分分析
        3.2 不同产地何首乌95%乙醇部位指纹图谱研究
            3.2.1 含量测定
            3.2.2 参照峰的选择
            3.2.3 指纹图谱的建立及共有峰的标定
            3.2.4 相似度计算
            3.2.5 聚类分析
            3.2.6 主成分分析
    4 讨论
总结
工作展望与思考
参考文献
附录
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3809909