皮诺敛酸对油酸诱导HepG2细胞脂质积累的抑制作用研究

发布时间：2023-07-27 09:01

　　红松籽油是从红松种籽中提取的一种天然油脂,其中含有丰富的亚油酸,油酸和皮诺敛酸等不饱和脂肪酸,其生物活性极其丰富,其中的皮诺敛酸是松籽油中特有的18个碳的不饱和脂肪酸。本文首次研究了皮诺敛酸抑制油酸诱导HepG2细胞中脂质积累及其初步分子机制。此外左旋肉碱是从红色肉类中提取出的一种类维生素,对减肥及脂肪的消耗有显著的作用。为达到最佳的降脂效果,本论文研究了皮诺敛酸/左旋肉碱复配物的最佳降脂浓度配比。本文主要研究成果如下:1.皮诺敛酸具有抑制HepG2细胞脂质累积作用。MTT实验结果表明0.5 mM油酸对HepG2及L02细胞的生存率没有显著的抑制作用,油红O染色结果表明,0.5 mM油酸处理HepG2细胞24h时,细胞内产生大量的脂滴。因此,采用0.5mM油酸培养HepG2细胞24 h,成功诱导HepG2细胞成脂。MTT实验表明皮诺敛酸处理HepG2及L02细胞12h时,其细胞生存率较高,40μM浓度以下的皮诺敛酸对HepG2及L02细胞均无显著的抑制作用。皮诺敛酸(10、15、20、25 μM)预处理12 h后,HepG2细胞内脂滴量、甘油三酯和总胆固醇含量显著降低(与模型组相比),...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 松籽的研究概况
        1.1.1 松籽简介
        1.1.2 松籽油的有效成分
        1.1.3 松籽油主要的药理活性
    1.2 皮诺敛酸的药理活性
    1.3 肥胖
        1.3.1 肥胖的概述
        1.3.2 肥胖产生的原因
        1.3.3 肥胖相关疾病的危害
        1.3.4 预防及治疗肥胖的措施
        1.3.5 天然产物对于减肥降脂的研究
    1.4 研究的目的和意义
2 皮诺敛酸对HepG2细胞脂质积累的抑制作用
    2.1 引言
    2.2 实验仪器和材料
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 主要仪器
        2.2.3 实验材料
        2.2.4 主要溶液配制
        2.2.5 细胞培养用品的准备
    2.3 实验方法与步骤
        2.3.1 细胞的复苏
        2.3.2 细胞的培养与传代
        2.3.3 MTT法检测HepG2和L02细胞的存活率
        2.3.4 筛选油酸诱导HepG2细胞脂滴积累的最适浓度
        2.3.5 检测皮诺敛酸处理后细胞内脂滴的含量
        2.3.6 检测细胞内总胆固醇及甘油三酯的水平
        2.3.7 实验数据分析
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 皮诺敛酸对HepG2及L02细胞增殖的影响
        2.4.2 油酸对HepG2及L02细胞增殖的影响
        2.4.3 油酸诱导HepG2细胞脂滴积累条件的确定
        2.4.4 皮诺敛酸对HepG2细胞中脂滴积累的影响
        2.4.5 皮诺敛酸对细胞中总胆固醇及甘油三酯水平的影响
    2.5 本章小结
3 皮诺敛酸降低油酸诱导HepG2细胞脂质积累的分子机制
    3.1 引言
    3.2 实验仪器和材料
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 主要仪器
        3.2.3 实验材料
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 实验方法与步骤
        3.3.1 细胞内抗氧化因子含量的检测
        3.3.2 细胞内MDA含量的检测
        3.3.3 流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平
        3.3.4 Wester blot检测细胞内氧化应激及脂质相关蛋白
        3.3.5 Wester blot检测AMPK通路相关蛋白
        3.3.6 实验数据分析
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 皮诺敛酸预处理对细胞抗氧化因子含量的影响
        3.4.2 皮诺敛酸预处理对细胞MDA含量的影响
        3.4.3 皮诺敛酸预处理对细胞活性氧水平的影响
        3.4.4 皮诺敛酸预处理对细胞Nrf2和HO-1蛋白的影响
        3.4.5 皮诺敛酸预处理对细胞成脂蛋白的影响
        3.4.6 皮诺敛酸通过激活AMPK/SIRT1通路抑制细胞脂质的积累
    3.5 本章小结
4 皮诺敛酸/左旋肉碱复配物降脂活性评估
    4.1 引言
    4.2 实验仪器和材料
        4.2.1 细胞株
        4.2.2 主要仪器
        4.2.3 实验材料
        4.2.4 主要溶液配制
    4.3 实验方法与步骤
        4.3.1 细胞的复苏
        4.3.2 细胞的培养与传代
        4.3.3 MTT法检测HepG2细胞活性
        4.3.4 油红O染色法检测细胞内脂滴含量
        4.3.5 优化皮诺敛酸/左旋肉复配物的最佳降脂浓度
        4.3.6 实验数据分析
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 皮诺敛酸及左旋肉碱对细胞活力的影响
        4.4.2 皮诺敛酸及左旋肉对细胞内脂滴积累的影响
        4.4.3 皮诺敛酸/左旋肉碱复配物最佳降脂浓度的确定
    4.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3837723