酸浆苦素B对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制探究

发布时间：2023-10-29 13:54

　　目的:作为茄科酸浆属植物的主要活性物质,酸浆苦素B具有非常广谱的生物活性,例如:抗炎、免疫调节和抗肿瘤。然而其在非小细胞肺癌中的作用和机制尚未明确阐明。我们前期研究发现,肺部组织可能是酸浆苦素B作用的靶向器官,同时其对A549细胞具有很好细胞毒作用。为了深入探究上述问题,本课题以人的非小细胞肺癌A549细胞作为研究对象,观察酸浆苦素B对该细胞的增殖抑制、周期调控及凋亡诱导等方面的作用,并对相关作用机制进行探究,进而为药物的开发提供新的思路。方法:(1)结合实时无标记细胞分析技术和统计学方法分析酸浆苦素B对A549细胞的增殖抑制作用;(2)运用流式细胞术观察酸浆苦素B对A549细胞周期、凋亡率的干预作用;(3)运用western bolt和real-time PCR技术检测酸浆苦素B作用下p53、p21、CDC2和Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平的变化,揭示其影响细胞周期及诱导凋亡的相关机制;(4)运用免疫荧光技术分析酸浆苦素B对胞内线粒体形态的影响;(5)运用海马能量代谢分析系统分析酸浆苦素B对线粒体呼吸链功能影响;(6)运用流式细胞术分析酸浆苦素B作用下,线粒体膜电势和活性氧...

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【学位级别】：硕士

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致谢
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 细胞凋亡
        1.2.1 细胞凋亡概念
        1.2.2 线粒体与细胞凋亡
    1.3 细胞周期
        1.3.1 细胞周期概念
        1.3.2 线粒体与细胞周期
    1.4 酸浆苦素B的研究进展
    1.5 本课题的研究思路
2 材料与方法
    2.1 实验细胞株
    2.2 实验药物
    2.3 实验试剂
        2.3.1 化学试剂
        2.3.2 抗体
        2.3.3 试剂盒
    2.4 实验仪器
    2.5 实验方法
        2.5.1 PB药物的配制法
        2.5.2 培养基的配制
        2.5.3 细胞培养与传代
        2.5.4 细胞计数(血球板计数法)
        2.5.5 实时无标记细胞分析术检测细胞增殖
        2.5.6 Annexin V-FITC/PI双染法检测早期细胞凋亡
        2.5.7 细胞周期检测
        2.5.8 线粒体膜电势(MMP)检测
        2.5.9 线粒体内活性氧(ROS)检测
        2.5.10 BCA法测定蛋白浓度
        2.5.11 蛋白免疫印迹
        2.5.12 real-time PCR
        2.5.13 氧耗速率测定
        2.5.14 分光光度法检测caspase活性
        2.5.15 ATP检测
        2.5.16 统计分析
3 结果
    3.1 PB抑制A549细胞增殖
    3.2 PB诱导A549细胞发生G₂/M细胞周期阻滞
    3.3 PB导致线粒体形态变化
    3.4 PB下调线粒体呼吸链复合物表达
    3.5 PB导致线粒体呼吸功能损伤
    3.6 PB降低A549细胞ATP产量
    3.7 PB诱导A549细胞线粒体膜电势下降
    3.8 PB诱导A549细胞氧化应激
    3.9 PB诱导A549细胞凋亡
4 讨论
5 结论
6 展望
参考文献
综述
    参考文献
作者简历



本文编号：3858211