疏肝健脾活血方调控HSC-SEC共培养Notch通路的作用机制研究

发布时间：2023-12-10 18:01

　　目的:动态观察应用疏肝健脾活血方含药血清对HSC-SEC共培养下HSC活力、SEC失窗孔及Notch通路的影响,探讨疏肝健脾活血方抗肝纤维化的作用机制。方法:制备疏肝健脾活血方含药血清;建立肝纤维化大鼠模型,观察肝组织病理形态变化,采用胶原酶灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离正常大鼠HSC、SEC及肝纤维化大鼠SEC。以Notch通路激活剂rh NF-κB、阻断剂DAPT及疏肝健脾活血方含药血清作用于HSC-SEC共培养体系,MTT法检测HSC活力,Western Blot法检测SEC中CD31、v WF及HSC中ColⅣ、Notch 1、Jagged 1、Hes 1蛋白表达量,RTq PCR法检测HSC中Notch 1、Jagged 1、Hes 1 m RNA表达情况。结果:与正常组比,模型组HSC活力上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比,NF组HSC活力及Jagged 1m RNA表达量上升(P<0.05,P<0.01),DAPT组HSC活力,CD31、ColⅣ、Notch 1、Jagged 1蛋白及Notch 1、Jagged 1、He...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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中英文对照
摘要
ABSTRACT
前言
一、材料与方法
    (一)材料
        1.实验动物
        2.主要仪器、耗材及试剂
    (二)方法
        1.中药含药血清提取
        2.HSC分离、培养及鉴定
        3.中药含药血清及Notch通路干预剂浓度筛选
        4.SEC分离、培养及鉴定
        5.细胞分组及药物干预
        6.观测指标
        7.统计方法
二、结果
    (一)大鼠一般情况及肝组织病理形态学观察
        1.一般情况
        2.肝组织病理形态学变化
    (二)SEC、HSC计数及鉴定
        1.SEC、HSC计数及形态观察
        2.SEC、HSC免疫荧光鉴定
    (三)中药含药血清及药物浓度筛选
        1.中药含药血清浓度筛选
        2.药物浓度筛选
    (四)HSC-SEC共培养下各组HSC活力检测
    (五)各组CD31、vWF、ColⅣ、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量
        1.造模2周组各指标蛋白相对表达量
        2.造模4周组各指标蛋白相对表达量
        3.造模8周组各指标蛋白相对表达量
    (六)各组Notch1、Jagged1、Hes1mRNA表达量
        1.造模2周组各指标mRNA相对表达量
        2.造模4周组各指标mRNA相对表达量
        3.造模8周组各指标mRNA相对表达量
三、分析与讨论
    (一)肝纤维化动物模型诱导方法
        1.肝纤维化不同造模方法比较
        2.CCl4法诱导大鼠肝纤维化的病理分期讨论
    (二)HSC活化是肝纤维化的中心环节
        1.HSC是ECM主要来源
        2.肝纤维化逆转重点在于抑制HSC活化
        3.原代HSC分离、鉴定与培养讨论
    (三)病理性血管新生是肝纤维化的主要特征
        1.SEC失窗孔是多种肝脏疾病的始动环节
        2.Notch通路与肝纤维化病理性血管新生密切相关
    (四)疏肝健脾活血方对HSC活化、SEC失窗孔及Notch通路的影响
        1.中医对肝纤维化的认识
        2.疏肝健脾活血方组方要义
        3.疏肝健脾活血方对HSC活化、SEC失窗孔及Notch通路的影响
四、小结
结论
参考文献
附图
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3872865