新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

发布时间：2024-02-14 04:54

　　目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加...

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【部分图文】：

图1GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响（±s,n=3)

不同浓度的GNA作用于BEL-7402细胞24、48、72h后，BEL-7402细胞存活率随时间和剂量依赖性降低，IC50分别为6.408、4.077、3.001μmol/L。见图1。3.2GNA对人肝癌细胞BEL-7402形态的影响

图5GNA对人肝癌细胞BEL-7402自噬相关蛋白表达的影响（±s,n=3)

不同浓度（1.5、3、6μmol/L)GNA作用细胞24h后，随药物浓度的增加，Beclin1、p62和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均显著增加（P<0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平无明显变化；Rap组各自噬相关蛋白的表达说明Rap可诱导人肝癌BEL-7402细胞发生自噬（见图5Ⅰ）。单独....

图2倒置显微镜下观察GNA对人肝癌细胞BEL-7402形态的影响（10×40倍）

空白对照组细胞贴壁生长，细胞数目较多且排列紧密，胞质均匀透明；Rap组细胞贴壁生长较少，细胞脱落、悬浮增加，形状不一，细胞碎片化；不同浓度GNA组，随药物浓度增加，细胞贴壁数量减少，排列不紧密，细胞悬浮增加，高浓度GNA组出现细胞碎片化。见图2。图2倒置显微镜下观察GNA对人肝....

图2倒置显微镜下观察GNA对人肝癌细胞BEL-7402形态的影响（10×40倍）

图2倒置显微镜下观察GNA对人肝癌细胞BEL-7402形态的影响（10×40倍）3.3GNA对人肝癌细胞BEL-7402自噬小体形成的影响

本文编号：3897776