基于Caco-2细胞单层模型研究翼首草总苷的吸收机理及转运特性

发布时间：2024-03-01 20:57

　　目的:本课题旨在建立适用于翼首草总苷中环烯醚萜苷类主要成分马钱苷、吴茱萸苷、獐牙菜苷及活性单体马钱苷元吸收机理研究的Caco-2细胞单层模型。同时基于分子对接技术探讨P-gp及MRP2转运蛋白抑制剂与马钱苷元的结合方式及作用力。研究翼首草总苷提取物中马钱苷、吴茱萸苷、獐牙菜苷及活性单体马钱苷元在Caco-2细胞单层模型中的渗透及跨膜转运机制,为进一步深入了解翼首草总苷在体内的吸收过程以及生物利用度等提供实验依据,并为马钱苷、吴茱萸苷、獐牙菜苷及含这三种成分的中药新剂型的研制提供科学依据。方法:1.培养Caco-2细胞,建立并评价Caco-2细胞单层模型:取对数生长期Caco-2细胞用完全培养基将细胞悬浮,以1×10⁵个/ml密度接种到12孔Transwell板上。于AP侧加入含细胞悬浮液的DMEM 0.5ml,于BL侧加入1.5ml培养基。第一周隔天换液1次,一周后每天换液一次,并在接种后的21天内测定其跨膜电阻值(TEER),考察模型的完整性及紧密性。通过考察相关标志物在Caco-2细胞模型上的渗透率,评价Caco-2细胞单层模型的通透性。2.采用分子对接技术预...

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
    1 研究背景
        1.1 Caco-2细胞单层模型
        1.2 Caco-2细胞模型在药物转运方式上的应用研究
        1.3 翼首草研究进展及工作基础
    2 研究思路
        2.1 课题噬待解决的问题
        2.2 本课题研究思路
第一部分 Caco-2细胞单层模型的构建及评价
    1 实验材料
        1.1 实验仪器
        1.2 实验试剂
        1.3 细胞株
    2 实验方法
        2.1 Caco-2细胞单层模型的建立
        2.2 Caco-2细胞单层模型的评价
        2.3 数据处理
        2.4 统计分析
    3 实验结果
        3.1 形态学观察
        3.2 完整性及紧密性验证
        3.3 稳定性考察
        3.4 通透性检测
    4 小结
第二部分 基于分子对接与Caco-2细胞模型研究马钱苷元的转运特性
    1 实验材料
        1.1 实验仪器及试剂
    2 实验方法
        2.1 分子对接考察马钱苷元与P-gp及MRP2的结合方式
        2.2 马钱苷元对Caco-2细胞毒性的考察及供侧浓度的确立
        2.3 样品配制
        2.4 马钱苷元的双向转运实验
        2.5 HPLC分析方法的建立
        2.6 数据处理
        2.7 统计分析
    3 实验结果
        3.1 马钱苷元与P-gp及维拉帕米分子对接结果
        3.2 马钱苷元与MRP2蛋白及环孢素A分子对接结果
        3.3 马钱苷元对Caco-2细胞毒性及供侧浓度考察
        3.4 马钱苷元的双向转运实验
        3.5 HPLC方法学考察
    4 小结
第三部分 基于Caco-2细胞单层模型研究翼首草总苷转运特性
    1 实验材料
        1.1 实验仪器及试剂
        1.2 实验药物
    2 实验方法
        2.1 Caco-2细胞单层模型的建立
        2.2 翼首草总苷对Caco-2细胞毒性的考察
        2.3 样品配制
        2.4 翼首草总苷的双向转运实验
        2.5 样品处理
        2.6 HPLC方法学考察
        2.7 数据处理
        2.8 统计分析
    3 结果
        3.1 翼首草总苷对Caco-2细胞毒性的考察
        3.2 翼首草总苷的双向转运
        3.3 HPLC分析方法学考察
    4 小结
讨论
结论
问题与展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果



本文编号：3915816