基于RhoA/ROCK通路探讨莲心总碱抗高血压及抑制主动脉重构的机制研究
发布时间：2024-03-21 03:36
目的:莲心总碱(Alkaloids from Nelumbinis Plumula,AFNP)降压及抑制主动脉重构的作用和机制尚不完全清楚。基于RhoA/ROCK通路在调节血管收缩舒张及主动脉重构中的重要作用,本研究以RhoA/RCOK通路为切入点探讨莲心总碱抗高血压及抑制主动脉重构的作用及分子机制,以期为莲心总碱的临床应用提供实验依据。方法:1.采用莲心总碱对SHR大鼠进行每日灌胃,连续给药8周,给药期间每周进行血压检测。2.采用HE染色观察莲心总碱对主动脉血管形态学的影响,计算血管中膜厚度/腔径(MT/LD)的比值以及中膜面积/管腔面积(MA/LA)的比值。3.采用Masson染色检测莲心总碱干预对SHR大鼠主动脉胶原形成的影响。4.采用Western blot检测莲心总碱干预对SHR大鼠主动脉血管中Collagen I和α-SMA蛋白表达的影响。5.通过体外血管张力实验检测莲心总碱对去甲肾上腺素(NE,1×10-66 mol·L-1)、氯化钾(KCl,6×10-22 mol·L-1)、血管紧张...
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略词
前言
第一部分 莲心总碱对SHR大鼠的降压及抑制主动脉重构作用
1 实验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 莲心总碱的制备
1.4 常用试剂的配制
2 实验方法
2.1 动物饲养
2.2 WKY和SHR的分组及给药
2.3 尾动脉法测量大鼠血压
2.4 主动脉组织 HE 染色
2.5 MASSON染色法观察血管胶原的生成
2.6 Western blot检测主动脉α-SMA及Collagen Ⅰ蛋白的表达
3 实验结果
3.1 莲心总碱对SHR大鼠收缩压，舒张压和平均动脉压的影响
3.2 莲心总碱对SHR大鼠主动脉形态及血管壁厚度的影响
3.3 莲心总碱对SHR大鼠主动脉MT/LD和MA/LA比值的影响
3.4 莲心总碱对SHR大鼠主动脉胶原生成的影响
3.5 莲心总碱对SHR大鼠主动脉中α-SMA及Collagen Ⅰ表达的影响
4 小结
5 讨论
第二部分 莲心总碱对离体主动脉血管环的舒张作用及机制研究
1 实验材料
1.1 药物与药品
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 常用试剂配制
2 实验方法
2.1 离体主动脉血管环的制备
2.2 主动脉血管环活性及内皮完整性检测
2.3 莲心总碱对静息状态下离体主动脉血管环张力的影响
2.4 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.5 莲心总碱对高钾刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.6 莲心总碱对去甲肾上腺素刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.7 L-NAME及吲哚美辛对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.8 内皮依赖性检测
2.9 KV通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.10 KCa通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.11 Kir通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.12 KATP通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.13 莲心总碱对CaCl2诱发血管收缩的影响
2.14 统计学分析
3 实验结果
3.1 莲心总碱对静息状态下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.2 莲心总碱对血管紧张素II刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.3 莲心总碱对去甲肾上腺素刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.4 莲心总碱对高钾刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.5 L-硝基精氨酸甲酯及吲哚美辛对莲心总碱舒张血管作用的影响
3.6 莲心总碱对去甲肾上腺素预收缩去内皮及不去内皮血管环张力的影响
3.7 电位控制型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.8 ATP敏感性钾通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.9 钙活化型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.10 内向性整流型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.11 莲心总碱对主动脉外钙内流的影响
4 小结
5 讨论
第三部分莲心总碱对Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞的作用及机制初探
1 实验材料
1.1 细胞株：
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 常用试剂的配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.2 药物浓度筛选
2.3 MTT检测细胞增殖
2.4 荧光染色法检测血管平滑肌细胞骨架改变
2.5 RhoA G-LISA法检测RhoA的活化
2.6 Western blot检测RhoA/ROCK通路蛋白的表达水平
2.7 数据统计分析
3 实验结果
3.1 莲心总碱对VSMC细胞活力的影响
3.2 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的VSMC细胞增殖的影响
3.3 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的血管平滑肌细胞表型转化的影响
3.4 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的RhoA/ROCK通路活化的影响
4 小结
5 讨论
结论
展望
参考文献
文献综述
信号通路与高血压研究及中医药治疗进展
参考文献
莲子心及其生物碱保护心血管的研究进展
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3933766
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略词
前言
第一部分 莲心总碱对SHR大鼠的降压及抑制主动脉重构作用
1 实验材料
1.1 试剂
1.2 仪器
1.3 莲心总碱的制备
1.4 常用试剂的配制
2 实验方法
2.1 动物饲养
2.2 WKY和SHR的分组及给药
2.3 尾动脉法测量大鼠血压
2.4 主动脉组织 HE 染色
2.5 MASSON染色法观察血管胶原的生成
2.6 Western blot检测主动脉α-SMA及Collagen Ⅰ蛋白的表达
3 实验结果
3.1 莲心总碱对SHR大鼠收缩压，舒张压和平均动脉压的影响
3.2 莲心总碱对SHR大鼠主动脉形态及血管壁厚度的影响
3.3 莲心总碱对SHR大鼠主动脉MT/LD和MA/LA比值的影响
3.4 莲心总碱对SHR大鼠主动脉胶原生成的影响
3.5 莲心总碱对SHR大鼠主动脉中α-SMA及Collagen Ⅰ表达的影响
4 小结
5 讨论
第二部分 莲心总碱对离体主动脉血管环的舒张作用及机制研究
1 实验材料
1.1 药物与药品
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 常用试剂配制
2 实验方法
2.1 离体主动脉血管环的制备
2.2 主动脉血管环活性及内皮完整性检测
2.3 莲心总碱对静息状态下离体主动脉血管环张力的影响
2.4 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.5 莲心总碱对高钾刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.6 莲心总碱对去甲肾上腺素刺激下离体主动脉血管环张力的影响
2.7 L-NAME及吲哚美辛对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.8 内皮依赖性检测
2.9 KV通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.10 KCa通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.11 Kir通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.12 KATP通道阻断剂对莲心总碱舒张血管作用的影响
2.13 莲心总碱对CaCl2诱发血管收缩的影响
2.14 统计学分析
3 实验结果
3.1 莲心总碱对静息状态下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.2 莲心总碱对血管紧张素II刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.3 莲心总碱对去甲肾上腺素刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.4 莲心总碱对高钾刺激下大鼠离体主动脉血管环张力的影响
3.5 L-硝基精氨酸甲酯及吲哚美辛对莲心总碱舒张血管作用的影响
3.6 莲心总碱对去甲肾上腺素预收缩去内皮及不去内皮血管环张力的影响
3.7 电位控制型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.8 ATP敏感性钾通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.9 钙活化型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.10 内向性整流型钾离子通道阻断剂对莲心总碱舒血管作用的影响
3.11 莲心总碱对主动脉外钙内流的影响
4 小结
5 讨论
第三部分莲心总碱对Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞的作用及机制初探
1 实验材料
1.1 细胞株：
1.2 试剂
1.3 仪器
1.4 常用试剂的配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.2 药物浓度筛选
2.3 MTT检测细胞增殖
2.4 荧光染色法检测血管平滑肌细胞骨架改变
2.5 RhoA G-LISA法检测RhoA的活化
2.6 Western blot检测RhoA/ROCK通路蛋白的表达水平
2.7 数据统计分析
3 实验结果
3.1 莲心总碱对VSMC细胞活力的影响
3.2 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的VSMC细胞增殖的影响
3.3 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的血管平滑肌细胞表型转化的影响
3.4 莲心总碱对Ang Ⅱ刺激引起的RhoA/ROCK通路活化的影响
4 小结
5 讨论
结论
展望
参考文献
文献综述
信号通路与高血压研究及中医药治疗进展
参考文献
莲子心及其生物碱保护心血管的研究进展
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3933766
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3933766.html
