荔枝核总皂苷抑制BV-2细胞活化的关键活性成分筛选

发布时间：2024-04-06 18:31

　　目的:分离纯化获得荔枝核总皂苷各组分,体外筛选荔枝核总皂苷抑制Aβ1-42诱导BV-2细胞活化的关键活性成分。方法:(1)采用AKTApurifier蛋白纯化系统,分离纯化荔枝核总皂苷获得各组分。(2)5μmol/LAβ1-42诱导BV-2细胞活化,荔枝核总皂苷及其各组分干预活化的BV-2细胞。(3)瑞氏-姬姆萨染色、光镜观察BV-2细胞形态学改变。(4)ELISA测定上清液TNF-α、IL-1β、IL-6 含量;(5)Real Time PCR 和 Western blot 分别检测 TNF-α、IL-1β、iNOSmRNA和总蛋白表达。结果:(1)分离纯化获得荔枝核总皂苷12个组分(1#～12#)。(2)荔枝核总皂苷抑制BV-2细胞活化关键有效组分的筛选①形态学:倒置显微镜下,对照组:细胞形态规整、胞体呈圆形或椭圆形、突起少。Aβ模型组:细胞数量减少、突触增加、细胞抱团现象明显、胞体膨大、明显阿米巴样改变等细胞活化的标志;荔枝核总皂苷组:细胞数量增加,细胞抱团现象减少,突触明显减少;荔枝核总皂苷各成分组细胞形态表现差异较大,1#、5#、6#组分组:细胞数量有所增加,突触减少,也有部...

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１荔枝核总皂苷ＨＰＬＣ图谱??Ｆｉ．?１?ＨＰＬＣ?ｓｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＬＳＳ??

析型高效液相色谱仪对荔枝核总皂苷进行分析，结果荔枝核总皂苷在实验??条件下能达到较好的分离效果，为后续制备型高效液相色谱对荔枝核总皂??苷进行分离纯化提供了参考依据，结果见图１。??ｍＡＵｌ?Ｓ?！？??６００－＾?？?０）?Ｎ?？??－?Ｏ?ｌ＼?ＪＯ?ｉ?｜?Ａ??５００?Ｓ....

图２荔枝核总皂苷分离收集组分示意图??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＳＳ??

按实验方法所述分离条件，利用ＡＫＴＡｐｕｒｉｆｉｅｒ蛋白纯化系统对荔枝核??总皂苷中主要成分进行分离纯化，按不同保留时间收集组分，共收集获得??荔枝核总皂苷１２个组分（见图２），纯化后样品经ＨＰＬＣ检测其色谱图可见??１２个组分在实验条件下均有较好的分离，各组分在不同保留时间下有....

图５各组细胞培养液中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６表达情况??Ａ：ＴＮＦ－ａ?含量；Ｂ：ＩＬ－ｌｐ?含量；Ｃ：ＩＬ－６?含量??与Ａｐ模型组比较〒＜?

含量的影响与荔枝核总皂苷组均无统计学差异（Ｐ?＞?０．０５）。提示，１Ｋ??３＃和５＃、６＃、８＃、９＃、１０＃组分对ＡＰ诱导的ＢＶ－２细胞活化的均有一定抑??制作用，以３＃和９＃组分最为明显。见图５?Ａ，?Ｂ，?Ｃ。??－３３－??

图６各组细胞形态学改变??Ａ：正常对照组Ｂ：ＡＰ模型组Ｃ：荔枝核总皂苷组??＃＃

２．１形态学改变??倒置显微镜（ｘ２００）下：正常对照组ＢＶ－２细胞圆形或椭圆形，细胞突起??较少，细胞分散，无明显抱团现象，细胞形态规则完整（图６Ａ）。Ａｐ模型??组（图６Ｂ）：细胞数量减少、突触增加、胞体出现膨大阿米巴状、细胞抱??团现象明显。荔枝核总皂苷组（图６Ｃ）：细胞数....

本文编号：3947019