基于p62-Keap1-NRF2通路的通腑养髓方对Wilson病模型TX小鼠神经元Ferroptosis的调控机制研究

发布时间：2024-04-23 21:22

　　Wilson病(Wilson’s disease)是一种多于青少年期起病的常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病,也是目前少数可以治疗的神经遗传病。临床资料显示,以肢体扭转、行走和吞咽困难等为主要临床表现且病程较长的脑型WD患者常规驱铜疗效差、病情恢复慢,学习、工作和生活能力严重受限,严重者甚至危及生命。因此,这些难治性脑型WD患者的治疗是目前WD临床诊疗所面临的难题。本研究团队在前期研究中根据WD中医辩证研究结果,创用通腑养髓方治疗脑型WD患者获得明显临床疗效,并从神经元凋亡和自噬等角度对其疗效机制进行了系列研究。研究发现,除了铜蓄积直接导致神经元损伤外,铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP)合成障碍和亚铁氧化酶活性减低所致的细胞内铁稳态失衡是难治性脑型WD神经元损伤的重要机制,也是这些患者常规驱铜疗效不佳的主要原因。近年来的研究还发现,一种铁依赖性非程序性细胞死亡方式——ferroptosis与多种神经退行性疾病的发病关系密切,且与脑型WD的神经元损伤机制相契合。进一步的研究发现,泛素结合蛋白/死骨片1(ubiquitin-binding protein/Sequestosome-...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词
前言
第一部分 WD模型TX乳鼠皮质神经元ferroptosis效应观察
    1 实验材料和仪器
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 小鼠ATP7b基因检测
        2.2 乳鼠皮质神经元的分离培养和鉴定
        2.3 实验分组及细胞处理
        2.4 细胞收集
        2.5 细胞生存率检测
        2.6 ICP-MS法测定神经元内Cu、Fe微量元素含量
        2.7 Elisa法检测铁代谢相关蛋白DST、TRF、TFR、FE
        2.8 流式细胞仪检测细胞ROS水平
        2.9 LDH漏出水平检测
        2.10 超氧化物歧化酶SOD水平的检测
        2.11 丙二醛MDA水平的检测
        2.12 还原型谷胱甘肽GSH含量的检测
        2.13 氧化型谷胱甘肽GSSG含量的检测
        2.14 统计学方法
    3 结果
        3.1 神经元鉴定
        3.2 MTT实验结果
        3.3 ICP-MS检测TX乳鼠皮质神经元内铜、铁元素水平结果
        3.4 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元铁代谢相关蛋白表达的影响
        3.5 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元ROS水平的影响
        3.6 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元LDH漏出率的影响
        3.7 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元超氧化物歧化酶SOD的影响
        3.8 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元丙二醛MDA的影响
        3.9 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元还原型谷胱甘肽GSH的影响
        3.10 Fer-1对TX乳鼠皮质神经元氧化型谷胱甘肽GSSG的影响
    4 讨论
    5 小结
第二部分 通腑养髓方对WD模型TX乳鼠神经元ferroptosis效应及p62-Keap1-NRF2 通路蛋白的调控
    1 实验材料和器材
        1.1 实验动物
        1.2 药物
        1.3 试剂
        1.4 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 分组
        2.2 通腑养髓方含药血清的制备
        2.3 Western Blot实验
        2.4 其他实验方法
        2.5 统计学方法
    3 结果
        3.1 MTT实验
        3.2 通腑养髓方对 TX 乳鼠皮质神经元内铜铁元素的影响
        3.3 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元内铁代谢相关蛋白的影响
        3.4 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元ROS的影响
        3.5 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元LDH漏出率的影响
        3.6 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元超氧化物歧化酶SOD的影响
        3.7 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元丙二醛MDA的影响
        3.8 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元还原型谷胱甘肽GSH的影响
        3.9 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元氧化型谷胱甘肽GSSG的影响
        3.10 通腑养髓方对TX乳鼠皮质神经元内p62-Keap1-NRF2通路相关蛋白的影响
    4 讨论
课题总结
参考文献
综述
    参考文献
附录
致谢



本文编号：3962772