梓醇对BMSCs成软骨分化及体外迁移的实验研究

发布时间：2024-11-03 01:00

　　目的:1.高效、稳定的体外培养大量的骨髓间充质干细胞(BMSCs),并对BMSCs进行细胞生物学鉴定。2.观察梓醇对BMSCs的细胞增殖作用,深入探讨梓醇对BMSCs促成软骨分化的作用。3.观察梓醇对体外BMSCs细胞迁移的影响,进一步研究梓醇在促细胞迁移过程与Wnt非经典信号通路Wnt5a/CaMKII的关系。方法:1.应用全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,取状态良好的第3代BMSCs行细胞表面抗原流式细胞检测及诱导成脂肪、成骨细胞分化。2.CCK-8法检测梓醇对BMSCs增殖的影响,RT-PCR检测梓醇对BMSCs分化为软骨细胞的特异性基因COLⅠ、Aggrecan和SOX9基因的表达。3.Transwell法观察梓醇对BMSCs细胞迁移的影响,并通过构建过表达Wnt5a慢病毒载体的方法感染BMSCs。通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白荧光表达及RT-PCR检测Wnt5a基因的表达量确定慢病毒感染效果。进一步Western-blot检测慢病毒感染BMSCs中CaMKII的表达来观察梓醇对其下游CaMKII蛋白的影响。结果:1.流式细胞检测细胞表面抗原标志物结果显示CD29、CD44、C...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

AB图1.1培养24h的原代细胞A和培养至第3代细胞B的形态学观察(100×）（三）BMSCs的流式细胞鉴定SD大鼠BMSCs流式细胞仪检测结果显示，培养的第3代BMSCs均表达CD29、CD44、CD90，阳性率分别为99.84%、96....

AB图1.1培养24h的原代细胞A和培养至第3代细胞B的形态学观察(100×）（三）BMSCs的流式细胞鉴定SD大鼠BMSCs流式细胞仪检测结果显示，培养的第3代BMSCs均表达CD29、CD44、CD90，阳性率分别为99.84%、96....

梓醇对BMSCs成软骨分化及体外迁移能力的实验研究骨、成脂诱导分化可见BMSCs体外成骨诱导3周后茜素红染色，细胞化结节形成，并逐渐融合，见图1.3；成脂诱导2，显示细胞胞浆内出现染红的脂滴，形态大小不一合，见图1.4。××

图1.4成脂诱导染红脂滴(×200)纯度、强活力、生物特性均一的BMSCs对用显得至关重要。早在半世纪前，Friede持造血和分化的祖细胞，并于1974年体外]，直至1991年Caplan将这类干细胞命名为于骨髓中，还能够从脐血、脂肪、骨骼、

本文编号：4010432