体外适宜温热刺激络脉相关血管内皮细胞后启动“通络行血”效应的细胞生物学机制研究

发布时间：2017-04-08 04:06

  本文关键词：体外适宜温热刺激络脉相关血管内皮细胞后启动“通络行血”效应的细胞生物学机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：以络脉相关血管内皮细胞为研究载体,在灸法作用本质的适宜温热刺激作用下,观察血管内皮细胞分泌血管舒缩调控物质ET-1、TM、PGI2含量的变化,进一步探讨络脉“感受刺激”后启动“通络行血”基本细胞生物学机制。 方法：运用静脉灌注酶消化法进行人脐静脉血管内皮细胞的体外培养,应用(Ⅷ因子)免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉血管内皮细胞。将人脐静脉血管内皮细胞分为正常组和适宜温热刺激组,(适宜温热为40℃,此温度根据本系列课题前期研究获得),适宜温热刺激组以40-C刺激30min,每日2次,连续刺激3日。倒置相差显微镜下观察细胞形态的动态变化。用ELISA (酶联免疫吸附测定)法检测血管内皮细胞释放ET-1、TM的含量,用EIA(酶免疫分析)法检测血管内皮细胞释放PGI2的含量。 结果：1.细胞形态变化：原代人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)的形态多是小多角形、短梭形或者球形,细胞均是单层生长且互不重叠。融合后的人脐静脉血管内皮细胞为扁平的多角形,多呈典型的铺路石或鹅卵石样排列,边界清楚；细胞核清晰,细胞核多为椭圆形或圆形,细胞核内染色质稀疏且空亮,核仁1-2个。传代的人脐静脉血管内皮细胞多呈典型的铺路石或鹅卵石样排列,边界清楚,细胞核清晰,细胞核多为椭圆形或圆形,细胞核内染色质稀疏且空亮,核仁1-2个；传至3-4代的人脐静脉血管内皮细胞生长速度减慢,出现折光性增加、胞体增大、胞突变细、胞浆内颗粒和空泡增加、细胞核分裂相减少等一系列衰老征象。适宜温热刺激后,人脐静脉血管内皮细胞形态发生变化,多数细胞轮廓变圆,细胞间隙增大,呈铺路石样排列,边界清楚,细胞核清晰,细胞核多为圆形,细胞核内染色质稀疏且空亮。人脐静脉血管内皮细胞采用DAB免疫细胞化学Ⅷ因子染色,封片后光镜下观察到胞浆中有棕黄色的颗粒。 2.适宜温热刺激后络脉相关血管内皮细胞ET-1的含量较正常组有所降低,且差异具有显著统计学意义(P0.05)；TM的含量较正常组有所升高,且差异具有极显著统计学意义(P0.01)；PGI2的含量较正常组有所升高,且差异具有极显著统计学意义(P0.01)。 结论：1.体外适宜温热刺激可能通过降低络脉相关血管内皮细胞中ET-1的含量,发挥舒张血管作用,实现络脉“通络行血”的作用。 2.体外适宜温热刺激促进络脉相关血管内皮细胞TM的释放,可能通过其抗凝维持血液正常运行的作用,实现络脉“行血”的作用。 3.体外适宜温热刺激能够促进络脉相关血管内皮细胞PGI2的释放,一方面可能通过促进血管扩张达到“通”,另一方面可能通过抑制血小板聚集达到“行血”作用。 4.在体外适宜温热刺激作用下,络脉“通络行血”功效的产生可能通过促进血管内皮细胞释放TM、PGI2,抑制ET-1分泌,以维持血液正常运行及血管正常舒缩功能而达到“通络行血”作用。
【关键词】：络脉 灸法 适宜温热刺激 人脐静脉血管内皮细胞 内皮素1(ET-1) 血栓调节蛋白(TM) 前列环素(PGI_2)
【学位授予单位】：贵阳中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstracts8-11
• 引言11-13
• 1 材料13-16
• 1.1 脐带来源13
• 1.2 主要试剂13-14
• 1.3 主要仪器设备14
• 1.4 主要实验用液成分及配制14-16
• 2 方法16-25
• 2.1 人脐静脉血管内皮细胞的原代、传代培养及鉴定16-20
• 2.2 体外适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞相关因子表达的影响20-24
• 2.3 统计分析24-25
• 3 结果25-27
• 3.1 人脐静脉血管内皮细胞的形态变化25
• 3.2 鉴定结果25
• 3.3 体外适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞ET-1含量的影响25-26
• 3.4 体外适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞TM含量的影响26-27
• 3.5 体外适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞PGI_2含量的影响27
• 4 讨论27-35
• 4.1 络脉与血管的相关性27-29
• 4.2 血络与血管内皮细胞的相关性29-30
• 4.3 灸法“温通”作用机制及适宜温度确定30-31
• 4.4 适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞ET-1含量的影响31
• 4.5 适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞TM含量的影响31-32
• 4.6 适宜温热刺激对络脉相关血管内皮细胞PGI_2含量的影响32
• 4.7 络脉“通络行血”功效与血管内皮细胞、血管舒缩物质的相关性32-34
• 4.8 体外适宜温热刺激启动络脉相关血管内皮细胞产生“通络行血”作用的机理探讨34-35
• 5 结论35-36
• 问题与展望36-37
• 参考文献37-40
• 附录一：中英文对照缩略词表40-41
• 附录二41-69
• 综述一41-51
• 参考文献46-51
• 综述二51-69
• 参考文献60-69
• 附录三：致谢69-70
• 附录四：个人简历70-71
• 附录五：实验图片71-72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张传英;唐照亮;;艾灸调节机体免疫功能研究概况[J];安徽中医学院学报;2009年02期

2 杨忠思,谭齐贤;血栓调节蛋白与肿瘤研究进展[J];青岛大学医学院学报;2003年01期

3 潘传四,揭羽青,饶淑萍,陈希琳,潘学武,朱志雄,月娥;原发性高血压、高血压并脑血栓患者与血栓素、前列腺环素的关系[J];标记免疫分析与临床;2001年03期

4 黄勇华,张微微,郝小淑;内皮素与中枢神经系统疾病[J];北京医学;2000年01期

5 刘伍立 ,江一平;浅谈微循环与络脉的关联[J];北京中医;1986年02期

6 史常永;络病论与微循环[J];中国医药学报;1992年05期

7 史恒军,赵宁侠,郭瑞林,任秦有,张周良,李斌;温和灸对健康人甲皱微循环影响的临床研究[J];成都中医药大学学报;2004年01期

8 陶坤;张义胜;张晓峰;王明海;金鑫;韩光锋;赵国海;;血栓素前列环素在大鼠轻症急性胰腺炎向重症急性胰腺炎转变中的变化和意义[J];肝胆外科杂志;2007年03期

9 杨莉;杨金生;李亮;朱兵;;灸法作用机理的研究现状与分析[J];光明中医;2010年05期

10 孙金波,单晓清;血栓调节蛋白与冠心病[J];国外医学(内科学分册);2002年04期

  本文关键词：体外适宜温热刺激络脉相关血管内皮细胞后启动“通络行血”效应的细胞生物学机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：292019