眼针介导中枢5-HT、VIP递质途径对肝郁脾虚型IBS大鼠结肠AQP8表达的影响

发布时间：2017-09-28 19:24

  本文关键词：眼针介导中枢5-HT、VIP递质途径对肝郁脾虚型IBS大鼠结肠AQP8表达的影响

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【摘要】：目的： 观察肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马、下丘脑、结肠组织5-HT、VIP、VIP-R与AQP8的表达变化，以及眼针干预对其影响。从中枢与外周两方面探讨肝郁脾虚型IBS病症结合模型的病理生理学基础，以及眼针干预的生物学效应，为阐明肝郁脾虚型IBS的发生及眼针疗法的干预机制提供实验依据。 材料与方法： 1. SPF级雄性Wistar大鼠40只，随即选取28只采用“精神刺激+饮食失宜+劳倦”方法建立肝郁脾虚型IBS动物模型。利用11±1℃冷水游泳至力竭（沉入水下10s不浮出）、禁食24h、禁水24h、45℃高温烤箱15min、夹尾5min、电击（30V，电击5s，间歇5s，共进行3min）六种刺激，每日随机选取一种刺激结合自制铁笼束缚1h，共进行3轮即18d。观察大鼠一般状态、体重变化及体重增长率等的变化对模型进行评价，通过评价后选取造模成功的大鼠24只，按照随机数字法分为正常组、模型组及眼针组，每组12只。眼针组造模后采用31号（直径13mm）毫针，针刺大鼠眼眶眶缘上1mm处的下焦区、大肠区、肝区、脾区进行干预7d。 2.采用ELISA法检测血清和结肠组织中5-HT、SP和VIP含量。 3.采用RT-PCR法检测结肠组织中VIP、VIP-R及AQP8的mRNA表达。 4.采用SABC免疫组化法检测海马、下丘脑及结肠中5-HT、VIP和VIP-R的表达并进行分析。 结果： 1.眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠一般状态及血清5-HT和SP含量的影响 1.1眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠一般状态的影响 造模成功的大鼠，表现为精神萎靡、烦躁、皮毛干枯散乱无光泽、扎堆或蛰伏在角落、明显消瘦、进食减少，大便变软或不成形，排便次数逐渐增多、便质变稀，肛门部多有粪便附着等。肝郁日久，木郁乘土，形成“肝郁脾虚证”表现。经7d针刺治疗后，眼针组大鼠上述情志方面表现有所好转，活动次数、进食量有所增加，排便次数明显减少，便质向正常好转；模型组则无明显变化。 与正常组相比，造模结束时（第18d）模型组及眼针组大鼠的体重增长率显著降低（P0.01），但二者之间差异无统计学意义（P0.05）；在第25d时，与正常组相比，模型组大鼠的体重增长率显著降低（P0.01）；与模型组相比，眼针组大鼠的体重增长率显著增加（P0.01）。与第18d正常组相比，模型组和眼针组大鼠的粪便含水率显著增加（P0.01），但二者之间无显著无统计学意义（P0.05）；与第25d正常组相比，模型组和眼针组大鼠的粪便含水率显著增加（P0.01），与第25d模型组相比，经过眼针干预后粪便含水率显著降低（P0.01）。 1.2眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠血清5-HT和SP含量的影响 与正常组血清相比，模型组和眼针组大鼠血清5-HT含量显著增加（P0.01），与模型组血清相比，眼针组大鼠血清5-HT含量显著降低（P0.01）；与正常组大鼠血清相比，模型组大鼠血清SP含量显著增加（P0.01），与模型组大鼠血清相比，眼针组大鼠血清5-HT含量明显降低（P0.05）。 2.眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠结肠组织5-HT、VIP、VIP-R及AQP8的影响 2.1眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠结肠组织5-HT含量及表达的影响 与正常组结肠相比，模型组与眼针组结肠组织5-HT含量显著增加（P0.01），与模型组大鼠结肠组织相比，经过眼针干预后其含量显著减少了（P0.01）。与正常组相比，模型组大鼠结肠组织5-HT的表达显著上调（P0.01），眼针组大鼠结肠组织5-HT的表达明显上调（P0.05）；与模型组相比，眼针组大鼠结肠组织5-HT的表达显著下调（P0.01）。 2.2眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠血清、结肠组织VIP含量及表达的影响 与正常组大鼠血清相比，模型组大鼠血清VIP含量显著增加（P0.01）；与模型组大鼠血清相比，眼针组大鼠血清VIP含量显著降低（P0.01）。与正常组大鼠结肠相比，模型组与眼针组大鼠结肠组织VIP含量显著增加（P0.01），与模型组大鼠结肠组织相比，经过眼针干预后其表达显著下调了（P0.01）。与正常组大鼠相比，模型组大鼠结肠组织VIP mRNA的表达显著上调（P0.01），眼针组大鼠结肠组织VIP mRNA的表达上调不明显（P0.05）；与模型组大鼠相比，眼针组大鼠结肠组织VIP mRNA的表达明显下调了（P0.05）。与正常组相比，模型组结肠组织VIP的表达显著上调（P0.01），与模型组相比，经过眼针干预后其表达显著下调了（P≤0.01）。 2.3眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠VIP-R表达的影响 与正常组大鼠相比，模型组大鼠结肠组织VIP-R mRNA的表达显著上调（P0.01）；与模型组大鼠相比，眼针组大鼠结肠组织VIP-R mRNA的表达显著下调了（P0.01）。与正常组大鼠相比，，模型组大鼠结肠组织VIP-R的表达显著上调（P0.01），眼针组大鼠结肠组织VIP-R的表达显著下调（P0.01）；与模型组大鼠相比，眼针组大鼠结肠组织VIP-R的表达显著下调了（P0.01）。 2.4眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠AQP8表达的影响 与正常组大鼠相比，模型组及眼针组大鼠结肠组织AQP8mRNA的表达显著下调（P0.01）；与模型组大鼠相比，眼针组大鼠结肠组织AQP8mRNA的表达显著上调了（P0.01）。与正常组大鼠相比，模型组大鼠结肠组织AQP8的表达显著下调（P0.01），眼针组大鼠结肠组织AQP8的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）；与模型组相比，眼针组大鼠结肠组织AQP8的表达显著上调（P0.01）。 3.眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马CA3区及下丘脑5-HT、VIP及VIP-R表达的影响 3.1眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马CA3区及下丘脑5-HT表达的影响 与正常组大鼠海马CA3区相比，模型组大鼠海马CA3区5-HT的表达显著下调（P0.01）；与模型组大鼠海马CA3区相比，眼针组大鼠海马CA3区5-HT的表达显著上调（P0.01）。与正常组大鼠下丘脑相比，模型组大鼠下丘脑5-HT的表达有所减少但差异无统计学意义（P0.05），眼针组大鼠下丘脑5-HT的表达明显上调（P0.05）；与模型组大鼠下丘脑相比，眼针组大鼠下丘脑5-HT的表达显著上调（P0.01）。 3.2眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马CA3区及下丘脑VIP表达的影响 与正常组大鼠海马CA3区相比，模型组大鼠海马CA3区VIP的表达显著上调（P0.01），眼针组大鼠海马CA3区VIP的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）；与模型组大鼠海马CA3区相比，眼针组大鼠海马CA3区VIP的表达明显下调（P0.05）。与正常组大鼠下丘脑相比，模型组大鼠下丘脑VIP的表达显著上调（P0.01），眼针组大鼠下丘脑VIP的表达无显著性变化（P0.05）；与模型组下丘脑相比，眼针组大鼠下丘脑VIP的表达显著下调（P0.01）。 3.3眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马CA3区及下丘脑VIP-R表达的影响 与正常组大鼠海马CA3区相比，模型组和眼针组大鼠海马CA3区VIP-R的表达显著上调（P0.01）；与模型组大鼠海马CA3区相比，眼针组大鼠海马CA3区VIP-R的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）。与正常组大鼠下丘脑相比，模型组大鼠下丘脑VIP-R的表达明显上调（P0.05），眼针组大鼠VIP-R的表达变化不明显，差异无统计学意义（P0.05）；与模型组大鼠下丘脑相比，眼针组大鼠VIP-R的表达显著下调了（P0.01）。 结论： 1.本研究采用“精神刺激+饮食失宜+劳倦”方法，成功建立了符合肝郁脾虚型IBS病证结合的动物模型。 2.肝郁脾虚型IBS模型大鼠血清5-HT及SP含量显著增加；眼针能够改善肝郁脾虚型IBS模型大鼠的证候；降低血清5-HT及SP含量。 3.肝郁脾虚型IBS模型大鼠结肠组织5-HT、VIP及VIP-R的表达明显上调，AQP8的表达下调；眼针干预将其逆转。 4.眼针“疏肝健脾”的可能机制之一，是下调结肠组织5-HT、VIP及VIP-R的表达，上调AQP8的表达。 5.肝郁脾虚型IBS模型大鼠海马及下丘脑5-HT表达下调，VIP及VIP-R表达上调；眼针干预能够使其逆转。 6.海马及下丘脑可能是“肝郁脾虚”证候的中枢反应区之一，5-HT及VIP递质系统参与了肝郁脾虚型IBS的形成。 7.眼针的“疏肝健脾”作用之一，是上调海马及下丘脑5-HT表达，下调VIP及VIP-R的表达。
【关键词】：肝郁脾虚 眼针 水通道蛋白8 5-羟色胺 血管活性肠肽
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-13
• 前言13-15
• 文献综述15-24
• 1 药物造模法16-17
• 1.1 皮下注射CCl4法16
• 1.2 CCl4注射与高脂饲料喂养联合法16
• 1.3 艾叶注射法16-17
• 2 情志刺激法17-19
• 2.1 激怒法17
• 2.2 束缚法17-18
• 2.3 塑料夹夹尾+隔日禁食（禁食时在鼠笼上方悬挂食物）法18
• 2.4 慢性束缚+饮食失节+孤养法18
• 2.5 慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法18-19
• 3. 复合法19-20
• 3.1 情致刺激+苦寒泻下复合法19-20
• 3.2 束缚+番泻叶复合法20
• 3.3 劳倦+饮食不节+激怒复合法20
• 3.4 慢性不可预知性应激复合法20
• 4. 存在的问题与展望20-22
• 参考文献22-24
• 第一部分：肝郁脾虚型 IBS 大鼠模型的建立及眼针干预的影响24-41
• 1 材料与方法24-27
• 2 结果27-33
• 讨论33-40
• 结论40-41
• 第二部分：眼针对肝郁脾虚型IBS模型大鼠结肠5-HT、VIP及AQP8表达的影响41-70
• 1 材料与方法41-48
• 2 结果48-65
• 讨论65-69
• 结论69-70
• 第三部分：眼针对肝郁脾虚型 IBS 模型大鼠海马及下丘脑 5-HT、VIP 表达的影响70-93
• 1 材料与方法70-72
• 2 结果72-87
• 讨论87-92
• 结论92-93
• 参考文献93-102
• 致谢102-103
• 个人简历103

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：937659