免疫磁珠法富集肺癌循环肿瘤细胞及临床意义研究

  [目的1：1.明确应用CI-101细胞搜寻仪是否能富集肺癌患者外周静脉血中的循环肿瘤细胞(CTCs),并对其进行鉴定及计数；2.统计肺癌患者、良性肿瘤患者及健康人外周血CTCs计数差异,分析CTCs与肺癌TNM分期和临床各参数之间相关性,明确CTCs是否能作为肺癌患者病情监测指标。[方法]1.选取5种不同肿瘤细胞系(即：NCI-H460、NCI-H446、7901、Hela、MCF-7)制成爬片,以GRP为抗体,用免疫组织化学染色检验各种细胞中GRP的表达情况。采用免疫磁珠法将不同浓度梯度的肿瘤细胞系进行分选,检测免疫磁珠法对肿瘤细胞的筛选效果,并绘制成曲线图。2.将不同数量的NCI-H446细胞掺入到5例健康志愿者的外周血中,通过免疫磁性细胞分离,计算该实验方法对肿瘤细胞的回收率。3.采集肺癌患者100例、肺部良性肿瘤40例、及30个健康志愿者的血样作为阴性对照,应用免疫磁珠法富集血中的循环肿瘤细胞(CTCs),检测该实验方法的特异性和敏感性,再用细胞荧光技术对循环肿瘤细胞行形态学分析,并用HE细胞染色方法鉴定肿瘤细胞。4.实验数据采用SPSS17.0软件包进行统计分析,用相关回归方法分析检出肿瘤细胞数与肿瘤细胞浓度关系,对变量进行正态性检验,实验结果以x±s表示；非正态分布或方差不齐的数据采用非参数秩和检验,相关性分析采用Spearman秩相关检验,以P0.05为差异有统计学意义,趋势图用EXCEL制作。[结果J：1.用免疫磁珠法检测不同数量的肿瘤细胞,随着肿瘤细胞浓度的增加,免疫磁珠法检测到的CTCs数量同时增加,相关性最好的肿瘤细胞株为NCI-H446细胞株,有显著相关性,相关系数为0.8667(P0.001,),掺入细胞间回归方程为：y=6.681X+26.795。将5种细胞系做成细胞爬片,用免疫组织化学技术检测细胞中的胃泌素释放肽(GRP)的表达,结果5种肿瘤细胞爬片免疫组化均为阳性,且其阳性表达率的高低与应用免疫磁珠法检测肿瘤细胞的检出率相一致。2.不同数量的NCI-H446细胞掺入到5例健康志愿者的外周血中,以验证本实验对肿瘤细胞的回收率,其回收率在72%-89%之间,回收的细胞与添加细胞间数量有显著相关性,相关系数为0.998(P0.001,),掺入细胞间回归方程为：y=0.781X+1 1.307。3.统计学分析得到：(1)免疫磁珠法检测100例肺癌患者、40例肺部良性肿瘤及30例健康志愿者外周血中的CTCs,并设定临界值,计算该实验方法的敏感度和特异度分别为：85%和71.4%。(2)肺癌患者组、肺部良性肿瘤患者组及健康志愿者组两两比较(P0.05),有统计学差异。(3)100例肺癌患者中,检测到的CTCs与临床各参数之间的比较：①患者的年龄(50岁组和50岁组)组间比较,P值0.769(P0.05)；男性组与女性组相比P值为0.536(P0.05),差异无统计学意义；②肿瘤直径3cm组和肿瘤直径≥3cm相比(P0.05),有统计学差异；③TNM分期Ⅲ期、Ⅳ期患者检出的循环肿瘤细胞明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P0.05),具有统计学差异；④33例有远处转移、40例骨转移、80例淋巴结转移组和20例无转移组的肺癌患者检出CTCs'情况比较,发现远处转移组和骨转移组患者的循环肿瘤细胞明显高于无转移组和淋巴结转移组,并且差异有统计学意义。而与肺癌的病理类型无关(P0.05)。4.肺癌患者临床参数与CTCs的相关性分析,CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别均无明显关系(P0.05)；而与肿瘤大小以及临床分期有密切关系,当肺癌直径大于3cm、有淋巴、骨转移或远处转移,其CTCs检出率明显相关(P0.05)；而与肺癌的病理类型无关(P0.05)。检出CTCs数与血清肿瘤标志物：CEA、CA125、 CA153、CA199升高明显相关(P0.05)；与淋巴细胞因子：CD3+CD4+、CD3+CD8、NK、T细胞绝对值、Th细胞绝对、TS细胞绝对、自然杀伤细、CIKN有相关性；与细胞因子：IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10有明显相关性(P0.05)。I结论].1.应用免疫磁珠法可以成功富集肺癌患者外周静脉血中的循环肿瘤细(CTCs);2.肺癌患者的循环肿瘤细胞(CTCs)数与患者的肿瘤大小、TNM分期、有无转移,血清肿瘤标志物等有相关性,可作为临床肺癌患者病情监测的辅助指标。

【关键词】：
【学位授予单位】：昆明医科大学

【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：
 

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