辐射对神经相关细胞外泌体的生物效应影响研究

发布时间：2017-04-29 12:14

  本文关键词：辐射对神经相关细胞外泌体的生物效应影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：放疗是颅内恶性肿瘤术后的主要辅助治疗手段。放疗过程中,电离辐射不仅对受辐照细胞造成直接辐射损伤,还能诱发辐射旁效应。辐射旁效应是指未直接受辐照的细胞表现出与受辐射细胞类似的生物学反应,与细胞间的信息通讯密切相关。外泌体是细胞分泌的一类小分子囊泡结构,是细胞间信息交流的一类重要载体。本文旨在通过研究外泌体在辐射旁效应中所发挥的作用,进一步探索辐射旁效应的机制,以期提高放疗治疗颅内恶性肿瘤的疗效。实验以神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y作为神经细胞的体外模型,首先通过培养基转移实验研究一定剂量γ-射线辐射后辐射旁效应的主要表现,然后通过细胞共孵育实验研究辐射对外泌体生物学效应的影响,最后通过差异蛋白组学鉴定研究辐射对外泌体蛋白表达的影响,从而推论得出外泌体介导辐射旁效应的机制。培养基转移实验的结果表明,辐射培养基能够促进细胞增殖,即此辐射条件下的辐射旁效应主要表现为细胞增殖促进。外泌体提取和鉴定的结果表明,受辐照细胞分泌的外泌体量远多于正常细胞。外泌体共孵育实验的结果表明,相对于正常外泌体,辐射外泌体能够促进细胞增殖,即辐射外泌体所表现出的生物学效应与辐射培养基一致。根据以上结果,我们推测外泌体在介导电离辐射旁效应中发挥了重要作用。此外,外泌体蛋白组学鉴定的结果表明,辐射外泌体的蛋白组分的确发生了变化,且这一变化与细胞间信息交流、细胞增殖与细胞凋亡等生物作用相关。根据以上结论我们可以推论得出,外泌体在介导电离辐射旁效应过程中发挥了重要作用,且这一作用与辐射引起的外泌体蛋白表达变化密切相关。
【关键词】：电离辐射 辐射旁效应 外泌体 细胞增殖
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 绪论10-20
• 1.1 本论文研究的目的和意义10
• 1.2 脑部肿瘤及治疗策略概述10-13
• 1.2.1 脑部肿瘤概述10-11
• 1.2.2 传统治疗方式概述及选择11-12
• 1.2.3 放疗治疗颅内恶性肿瘤概述12-13
• 1.3 电离辐射旁效应概述13-15
• 1.3.1 电离辐射引起生物学效应概述13-14
• 1.3.2 电离辐射旁效应概述14-15
• 1.4 外泌体概述15-19
• 1.4.1 外泌体定义15-16
• 1.4.2 外泌体结构和组成16-18
• 1.4.3 外泌体生物学功能18-19
• 1.5 本课题的研究思路19-20
• 第2章 材料与方法20-30
• 2.1 细胞培养与 γ-射线辐射处理20
• 2.2 培养基去外泌体处理与外泌体提取20-22
• 2.2.1 培养基去外泌体处理20-21
• 2.2.2 外泌体提取21-22
• 2.3 免疫印迹法鉴定外泌体22-26
• 2.3.1 细胞全蛋白制备22
• 2.3.2 外泌体蛋白制备22
• 2.3.3 SDS-PAGE22-23
• 2.3.4 转膜23-24
• 2.3.5 显影24-25
• 2.3.6 二次免疫印迹25-26
• 2.4 细胞增殖检测与细胞计数26-27
• 2.4.1 细胞计数26
• 2.4.2 MTS检测法26
• 2.4.3 CCK-8 检测法26-27
• 2.5 流式法测细胞周期分布27-28
• 2.6 外泌体蛋白组学鉴定28-30
• 2.6.1 试剂配制28
• 2.6.2 样品处理28-29
• 2.6.3 酶解标记29
• 2.6.4 质谱分析与数据处理29-30
• 第3章 实验结果与讨论30-46
• 3.1 辐射剂量的确定30-32
• 3.1.1 不同辐射剂量下SH细胞的周期分布30-31
• 3.1.2 选择辐射剂量下SH细胞的形态变化31-32
• 3.2 辐射培养基对细胞增殖及细胞周期分布影响研究32-37
• 3.2.1 辐射培养基的获得32
• 3.2.2 辐射培养基对细胞增殖的作用32-34
• 3.2.3 辐射培养基对细胞周期分布的作用34-35
• 3.2.4 增殖相关蛋白的免疫印迹检测35-37
• 3.2.5 小结37
• 3.3 辐射外泌体对细胞增殖及细胞周期分布影响研究37-42
• 3.3.1 外泌体的提取与鉴定37-38
• 3.3.2 辐射外泌体对细胞增殖的作用38-40
• 3.3.3 辐射外泌体对细胞周期分布的作用40-42
• 3.3.4 小结42
• 3.4 外泌体的蛋白组学鉴定42-46
• 3.4.1 外泌体样品的处理与考染分析42-43
• 3.4.2 差异蛋白的鉴定与生物学功能分析43-45
• 3.4.3 小结45-46
• 结论46-47
• 参考文献47-52
• 附录52-57
• 攻读学位期间发表论文与研究结果清单57-58
• 致谢58

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