肿瘤相关成纤维细胞MSI2促进肝癌进展的机制研究
发布时间：2021-12-18 07:57
研究背景及目的:肿瘤微环境作为肿瘤细胞存续的外环境,是影响肿瘤细胞生物学行为的关键因素。肿瘤中的肌成纤维细胞,也称肿瘤相关成纤维细胞（Cancerassociated fibroblast,CAF）是肿瘤微环境的主要间质细胞,在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用。我们发现,Musashi2（MSI2）在肿瘤相关成纤维细胞中高表达,并与CAF介导的肿瘤侵袭转移密切相关。本研究拟探究肌成纤维细胞中MSI2影响肝癌进展的作用及相关分子机制。研究方法:天狼星红、免疫组化和免疫荧光染色观察肿瘤组织中胶原沉积以及α-SMA和MSI2表达与共定位情况;通过Cre-LoxP系统构建敲除肌成纤维细胞Msi2的基因鼠;通过密度梯度离心分离小鼠原代肝星状细胞,体外诱导激活成肌成纤维细胞;利用原代肌成纤维细胞条件培养基处理肝癌细胞,确定体外肌成纤维细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响。CCl4灌胃诱导小鼠肝纤维化后构建肝原位移植瘤模型,观察条件敲除肌成纤维细胞和/或肝癌细胞MSI2对肿瘤进展的影响;通过RNA测序分析Msi2基因对成纤维细胞相关基因表达的影响;通过Kaplan Meier生存曲线分析肿瘤胶原沉积对肝癌患者预...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－２肿瘤胶原沉积与肝癌（Ｘ－ＳＭＡ表达正相关??
?博士学位论文???物表达上调（图１－６）。收集体外培养不同时间，激活程度不同的小鼠原代肝星状细胞，实时??定量ＰＣＲ检测发现，随着小鼠原代肝星状细胞的激活（ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表达上调），Ｍｓｉ２??表达上调（图１－７Ｂ）；免疫荧光检测同样显示，Ｍｓｉ２在肝星状细胞激活为肌成纤维细胞（激??活肝星状细胞）的过程中表达上调（图１－７Ａ）。此夕卜，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测体外培养不同时间的??肝星状细胞Ｍｓｉ２、ａ－ＳＭＡ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ蛋白表达，结果同样表明，随着体外培养激活，Ｍｓｉ２??表达上调，并且也可见成纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ、Ｈｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表达上调（图１－８）。证实ＭＳＩ２??在激活的肝星状细胞（既肌成纤维细胞）中表达上调。??Ｄａｙ１?Ｄａｙ７??Ｉ?你?二??｜?＃?咿??图１－６分离的原代肝星状细胞体外培养激活成肌成纤维细胞??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｐｒｉｍａｉｙ?ｈｅｐａｔｉｃ?ｓｔｅｌｌａｔｅ?ｃｅｌｌ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｕｌｔｕｒｅ??左图为分离的小鼠原代肝星状细胞贴壁后ｉ天，可见细胞呈不规则圆形，并含有较多脂滴；右图为分离??的小鼠原代肝星状细胞体外培养７天，成为激活的肝星状细胞（肌成纤维细胞），其细胞内脂滴明显减少消??失，细）肺嫩化，呈长梭形。??Ａ?Ｂ?＾?Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ??？２??Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ?塞６?ｐ??■ＳＢ?ｒｌＪｌｌ??Ｍｓｉ２?ｑ－ＳＭＡ?Ｃｏｌ１ａ１??口?Ｄ１?￣Ｃ３Ｄ３￣Ｈ１Ｄ７??口?Ｄ５?ＨＤ１０??阁ｌ－７小
?博士学位论文???可见检测到明显的Ｍｓｉ２与ａ－ＳＭＡ表达；Ｂ实时定量ＰＣＲ检测不同培养天数的小鼠肝原代星状细胞Ｍｓｉ２、??ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ的表达’结果显示，随着小鼠原代肝星状细胞体外培养天数增加，细胞向肌成纤维细胞表??型变化：ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表达上调，并伴Ｍｓｉ２表达上调。??Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍｏｕｓｅ?ＨＳＣｓ??Ｄａｙ?１?３?５?７?９??Ｍｓｉ２?？?？??ｆｎ｜??ａ－ＳＭＡ?？??｜３－ａｃｔｉｎ?ｍｂ??图１－８小鼠原代肝星状细胞体外培养激活成成纤维细胞，并伴ＭＳＩ２表达上调??Ｆｉｇｕｒｅ?卜８?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｉｙ?ＨＳＣ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ?ｗｉｔｈ?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ结果显示小鼠原代肝星状细胞培养成为成纤维细胞后出现ＭＳ１２表达上调。??１．２．５?ＭＳＩ２在肿瘤相关成纤维细胞中高銳??此外，我们还通过免疫荧光共染，检测了人肝癌组织切片中的肌成纤维细胞和由人肝癌??组织中分离的原代肌成纤维细胞（肿瘤相关成纤维细胞）中的ＭＳＩ２表达情况。结果发现在??ａ－ＳＭＡ阳性的肌成纤维细胞中存在较高水平的ＭＳＩ２表达（图１－９?Ａ和Ｂ）。??Ａ?Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｂ?ＣＡＦ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｕｍａｎ?ＨＣＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ??图１－９?ＭＳＩ２在肿瘤相关成纤维细胞中高表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－９?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｔｕｍｏｒ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ??Ａ肝癌
【参考文献】：
期刊论文
[1]分子靶向药物与免疫检查点抑制剂治疗晚期肝细胞癌的研究现状与进展[J]. 刘琳,秦叔逵. 临床肿瘤学杂志. 2019(09)
本文编号：3541963
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－２肿瘤胶原沉积与肝癌（Ｘ－ＳＭＡ表达正相关??
?博士学位论文???物表达上调（图１－６）。收集体外培养不同时间，激活程度不同的小鼠原代肝星状细胞，实时??定量ＰＣＲ检测发现，随着小鼠原代肝星状细胞的激活（ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表达上调），Ｍｓｉ２??表达上调（图１－７Ｂ）；免疫荧光检测同样显示，Ｍｓｉ２在肝星状细胞激活为肌成纤维细胞（激??活肝星状细胞）的过程中表达上调（图１－７Ａ）。此夕卜，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测体外培养不同时间的??肝星状细胞Ｍｓｉ２、ａ－ＳＭＡ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ蛋白表达，结果同样表明，随着体外培养激活，Ｍｓｉ２??表达上调，并且也可见成纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ、Ｈｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表达上调（图１－８）。证实ＭＳＩ２??在激活的肝星状细胞（既肌成纤维细胞）中表达上调。??Ｄａｙ１?Ｄａｙ７??Ｉ?你?二??｜?＃?咿??图１－６分离的原代肝星状细胞体外培养激活成肌成纤维细胞??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｐｒｉｍａｉｙ?ｈｅｐａｔｉｃ?ｓｔｅｌｌａｔｅ?ｃｅｌｌ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｕｌｔｕｒｅ??左图为分离的小鼠原代肝星状细胞贴壁后ｉ天，可见细胞呈不规则圆形，并含有较多脂滴；右图为分离??的小鼠原代肝星状细胞体外培养７天，成为激活的肝星状细胞（肌成纤维细胞），其细胞内脂滴明显减少消??失，细）肺嫩化，呈长梭形。??Ａ?Ｂ?＾?Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ??？２??Ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＨＳＣ?塞６?ｐ??■ＳＢ?ｒｌＪｌｌ??Ｍｓｉ２?ｑ－ＳＭＡ?Ｃｏｌ１ａ１??口?Ｄ１?￣Ｃ３Ｄ３￣Ｈ１Ｄ７??口?Ｄ５?ＨＤ１０??阁ｌ－７小
?博士学位论文???可见检测到明显的Ｍｓｉ２与ａ－ＳＭＡ表达；Ｂ实时定量ＰＣＲ检测不同培养天数的小鼠肝原代星状细胞Ｍｓｉ２、??ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ的表达’结果显示，随着小鼠原代肝星状细胞体外培养天数增加，细胞向肌成纤维细胞表??型变化：ａ－ＳＭＡ及Ｃｏｌｌａｌ表达上调，并伴Ｍｓｉ２表达上调。??Ｐｒｉｍａｒｙ?ｍｏｕｓｅ?ＨＳＣｓ??Ｄａｙ?１?３?５?７?９??Ｍｓｉ２?？?？??ｆｎ｜??ａ－ＳＭＡ?？??｜３－ａｃｔｉｎ?ｍｂ??图１－８小鼠原代肝星状细胞体外培养激活成成纤维细胞，并伴ＭＳＩ２表达上调??Ｆｉｇｕｒｅ?卜８?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｍｏｕｓｅ?ｐｒｉｍａｉｙ?ＨＳＣ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ａｓ?ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ?ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ?ｗｉｔｈ?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ结果显示小鼠原代肝星状细胞培养成为成纤维细胞后出现ＭＳ１２表达上调。??１．２．５?ＭＳＩ２在肿瘤相关成纤维细胞中高銳??此外，我们还通过免疫荧光共染，检测了人肝癌组织切片中的肌成纤维细胞和由人肝癌??组织中分离的原代肌成纤维细胞（肿瘤相关成纤维细胞）中的ＭＳＩ２表达情况。结果发现在??ａ－ＳＭＡ阳性的肌成纤维细胞中存在较高水平的ＭＳＩ２表达（图１－９?Ａ和Ｂ）。??Ａ?Ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｂ?ＣＡＦ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｕｍａｎ?ＨＣＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ??图１－９?ＭＳＩ２在肿瘤相关成纤维细胞中高表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１?－９?ＭＳＩ２?ｏｖｅｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｔｕｍｏｒ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ??Ａ肝癌
【参考文献】：
期刊论文
[1]分子靶向药物与免疫检查点抑制剂治疗晚期肝细胞癌的研究现状与进展[J]. 刘琳,秦叔逵. 临床肿瘤学杂志. 2019(09)
本文编号：3541963
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3541963.html
最近更新
教材专著
