果蝇干细胞表面标志物CD133/prominin-like和CD117/PVR的互作蛋白鉴定及功能研究
发布时间：2021-12-23 11:13
肿瘤干细胞（cancer stem cell）是肿瘤中一小群有干细胞特性的癌细胞,具有自我更新和多细胞分化等能力,是肿瘤发生、增殖、迁移和抗放化疗的重要原因。发现特异性的肿瘤细胞干细胞表面标志物,分离鉴定肿瘤于细胞,是研究肿瘤发生机制及其治疗方法的关键。CD133和CD117是重要的肿瘤干细胞表面标志分子,参与细胞生长、发育和肿瘤发生转移等过程,但是其互作蛋白及生物学功能仍需要进一步深入的研究。本论文以果蝇S2细胞为材料,通过RNAi技术阻断CD133同源基因prominin-like的表达,发现线粒体外膜蛋白（VDAC）和复合体Ⅰ亚基（NDUFS3）、复合体Ⅳ亚基（COXⅣ）等蛋白表达在prominin-like缺失的前2天显著降低,第3天后基本恢复到正常水平；复合体Ⅴ（ATP5a）蛋白表达几乎不受影响。与之相应的,prominin-like缺失细胞的ATP产量在1天和2天后显著降低,3天后回到正常细胞水平；ROS产量在1天和2天后显著升高,3天后回到正常细胞水平。表明prominin-like缺失会导致线粒体快速损伤,引起线粒体功能障碍。进一步通过FLP-FRT重组方法和CRISP...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【图文】：
细胞凋亡途径示意图aoo
第二章ＣＤ１３ｙＰｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失导致果购线粒体功能障碍的机制研究，ＲＮＡｉ技术提供了一种快速有效的研究基因功能的新方法。目前ｄ、真菌及植物等生物中构建ＲＮＡｉ技术。??验材料??验材料??果蜗Ｓ２细胞，实验室保存。??．Ｃｏｌｉ?ＤＨ５ａ，胸自?ＴｒａｎｓＧｅｎ?Ｂｉｏｔｅｃｈ?公司。??真核表达质粒ｐＡｃ５．１－３ｘｆｌａｇ，实验室保存。??
凶２．５?ＲＮＡｉ处理不同时间后Ｓ２细胞内ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ表达Ｍ??随后我们通过ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测了?ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ处理后细胞内??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白含量变化。结果如图２．６所示，与ｍＲＮＡ含量变化相比，其??蛋白含量的改变程度更加显著，ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白量在ＲＮＡｉ?—天后即大幅度降??低，随着时间的增加降低量持续增加，这种蛋白水平的降低同样可Ｗ持续４天。??Ｄａｙ！?Ｄａｙ２?Ｄａｙ３?Ｄａｙ４??Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ??Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ??口－ｔｕｂｕ＂ｎ?＜—■？?ｍｍｉｉｉｍ??图２．６?ＲＮＡｉ处理Ｓ２细胞后ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋Ａ表达Ｍ??通过检测ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ后Ｓ２细胞内ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ和蛋白含量，??我们发现ＲＮＡｉ技术可Ｗ显著降低细胞内该蛋白的表达量，从而成功建立??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ敲低细胞模型，为后续实验的开展提供了良好的实验材料。??２．４．４?Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失对线粒体相关蛋白表达的影响??通过检测ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失Ｓ２细胞的细胞增殖、ＡＴＰ产生和ＲＯＳ产生
【参考文献】：
期刊论文
[1]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)
本文编号：3548373
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【图文】：
细胞凋亡途径示意图aoo
第二章ＣＤ１３ｙＰｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失导致果购线粒体功能障碍的机制研究，ＲＮＡｉ技术提供了一种快速有效的研究基因功能的新方法。目前ｄ、真菌及植物等生物中构建ＲＮＡｉ技术。??验材料??验材料??果蜗Ｓ２细胞，实验室保存。??．Ｃｏｌｉ?ＤＨ５ａ，胸自?ＴｒａｎｓＧｅｎ?Ｂｉｏｔｅｃｈ?公司。??真核表达质粒ｐＡｃ５．１－３ｘｆｌａｇ，实验室保存。??
凶２．５?ＲＮＡｉ处理不同时间后Ｓ２细胞内ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ表达Ｍ??随后我们通过ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测了?ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ处理后细胞内??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白含量变化。结果如图２．６所示，与ｍＲＮＡ含量变化相比，其??蛋白含量的改变程度更加显著，ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白量在ＲＮＡｉ?—天后即大幅度降??低，随着时间的增加降低量持续增加，这种蛋白水平的降低同样可Ｗ持续４天。??Ｄａｙ！?Ｄａｙ２?Ｄａｙ３?Ｄａｙ４??Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ??Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ??口－ｔｕｂｕ＂ｎ?＜—■？?ｍｍｉｉｉｍ??图２．６?ＲＮＡｉ处理Ｓ２细胞后ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋Ａ表达Ｍ??通过检测ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ后Ｓ２细胞内ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ和蛋白含量，??我们发现ＲＮＡｉ技术可Ｗ显著降低细胞内该蛋白的表达量，从而成功建立??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ敲低细胞模型，为后续实验的开展提供了良好的实验材料。??２．４．４?Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失对线粒体相关蛋白表达的影响??通过检测ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失Ｓ２细胞的细胞增殖、ＡＴＰ产生和ＲＯＳ产生
【参考文献】：
期刊论文
[1]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)
本文编号：3548373
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