环状RNA FAM114A2作为miR-76的分子海绵抑制膀胱癌进展的机制研究

发布时间：2021-12-25 10:25

　　目的:膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,其高发病率和易复发特征使死亡率呈逐年上升趋势。虽然外科技术在不断地更新与发展,辅助治疗也在推陈出新,但晚期膀胱癌的5年生存率仍然不理想。膀胱癌的治疗策略仍然是全世界研究者面临的一大严峻课题。膀胱癌的发病因素十分复杂,具体分子机制目前尚不清楚。大量证据表明,环状RNA（circ RNAs）在癌症的发病机制中起着关键作用。然而,在膀胱癌中circ RNAs作用机制的相关研究较少。本文通过探究circ FAM114A2在膀胱癌中的作用机制,旨在为膀胱癌的治疗提供新的方向。方法:从RNA测序数据中筛选出差异表达的circ RNAs,通过q RT-PCR从膀胱癌组织和细胞中验证其表达量,将差异性表达最明显的circ RNA确定为候选研究目标。并用q RT-PCR检测目标circ RNA相关的mi RNAs和m RNAs在人体组织和细胞中的表达水平。用FISH实验检测circ RNA和mi RNA的表达位置。用RNA pull-down实验和luciferase reporter实验研究特异性circ RNA、mi RNA和m RNA之间的相互作用。通过... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

膀胱癌的发病率与死亡率

南京大学硕士学位论文10膀胱癌的分期与其他肿瘤不同，根据肿瘤浸润深度可将膀胱癌分为两种类型：非肌肉浸润性膀胱癌(Tis、Ta、T1)和肌肉浸润性膀胱癌(T2、T3、T4)[4]（图2）。图2膀胱癌分期。Tis是发生于膀胱黏膜层的扁平肿瘤，即原位癌；Ta期是肿瘤呈乳头状突起，基地部未突破黏膜层；T1期肿瘤基地深入固有层；T2期肿瘤浸润深度达膀胱逼尿肌（T2a肿瘤浸润深度为浅肌层（内1/2）；T2b肿瘤浸润深度为深肌层（外1/2）；T3期肿瘤浸润深度超过膀胱全层达膀胱周围脂肪组织（T3a显微镜下发现膀胱周围组织浸润；T3b肉眼可见膀胱周围组织浸润）；T4期肿瘤侵犯膀胱外组织或器官（T4a肿瘤侵犯前列腺、精囊、子宫或阴道；T4b肿瘤侵犯盆壁或腹壁）。膀胱癌的侵袭深度对手术方式的选择具有重要指导意义。按照国际指南推荐，早期非肌肉浸润性膀胱癌采用经尿道膀胱肿瘤电切术（transurethralresectionofbladdertumor,TURBT）辅以膀胱灌注化疗。其中，虽然原位癌(Tis)是非肌肉浸润性膀胱癌，但一般分化较差，属于高度恶性肿瘤，向肌层浸润进展和远处转移风险较高，因此，应将原位癌与其他非肌肉浸润性膀胱癌（Ta、T1）相区别。而肌肉浸润性膀胱癌采用根治性全膀胱切除术。虽然70%-80%的患者初诊为非肌肉浸润性膀胱癌，但约50%-70%病人将在5年内复发，其中10%-30%可进展为肌肉浸润性膀胱癌，从而导致较差的预后和较低的5年生存率[5]。即使在那些接受手术和化疗等最佳治疗的肌肉浸润性膀胱癌患者中，由于肿瘤远处转移，5年

南京大学硕士学位论文11总生存率也只有60%[6]。因此，阐明膀胱癌进展的分子机制，将有助于开发更有效的治疗方案，对提高患者总体生存率具有重要的临床意义。环状RNA(circRNA)是一种新型的非编码小RNA，其特征是不具有3"端和5"末端，首尾相连形成共价闭环结构[7]。1976年Sanger等科学家在植物类病毒中首次发现并证实了circRNA的存在及共价闭合环状结构[8]。随后Hus等[9]在真核生物中也发现了circRNA的存在，但最初这些新的发现并没有引起足够的重视。在接下来的20多年中科学家们相继从酵母线粒体及哺乳动物中发现了大量circRNA，才逐步认识到广泛存在的circRNA并非是分子剪接过程中偶然产生的“分子垃圾”，而可能具有某些潜在作用[10-12]。在探索其产生机制时发现，与线性RNA不同，circRNA通常起源于外显子或内含子的反向剪接事件，反向互补序列（包括反向重复的Alu对和外显子跳跃）是circRNA形成的关键因素[13-14]（图3）[15]。图3环状RNA的剪切形成过程。根据形成组分不同，circRNA可分为4种类型：外显子circRNA（ecircRNA）、内含子circRNA（ciRNA）、外显子-内含子的circRNA（EIciRNA）以及基因间区环状RNA[16]（图4）[17]。


本文编号：3552284