LncRNA SMARCC2/miR-551b-3p/TMPRSS4轴在胃癌发生发展中的作用及其机制研究

发布时间：2022-01-23 22:53

　　目的MicroRNA芯片显示miR-551b-3p在胃癌组织中表达下调,但是其在胃癌发生发展中的作用及机制尚不明确。本研究以miR-551b-3p为焦点,深入探讨miR-551b-3p在胃癌发生发展中的作用以及在胃癌分子调控网络中所处位置。方法1.采用实时定量PCR法检测miR-551b-3p在胃癌细胞和胃正常粘膜上皮细胞中的表达水平,胃癌和癌旁组织中miR-551b-3p的表达差异,并分析其与胃癌临床病理特征之间的相关性。2.采用瞬时转染和慢病毒感染技术建立miR-551b-3p过表达胃癌细胞模型。通过细胞生长曲线测定、平板集落形成实验、细胞凋亡测定、划痕实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验、裸鼠移植瘤实验等分析上调miR-551b-3p表达后对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。3.联合RNA-seq、生物信息学方法筛选mi R-551b-3p的靶基因,利用生物信息学方法预测miR-551b-3p上游lncRNA。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-551b-3p和靶基因、上游lncRNA和miR-551b-3p的相互作用。采用Western blot技术检测胃癌细... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 miR-551b-3p在胃癌中的表达及临床意义
    1 材料
        1.1 细胞株
        1.2 胃癌组织标本
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
        1.5 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 贴壁细胞的培养
        2.2 细胞和组织总RNA的提取
        2.3 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞和组织中miR-551b-3p的表达
        2.4 统计学处理
    3 结果
        3.1 miR-551b-3p在胃癌细胞中低表达
        3.2 miR-551b-3p在胃癌组织中低表达
        3.3 miR-551b-3p表达与患者临床病理参数的相关性
    4 讨论
第二部分 miR-551b-3p对胃癌生物学行为的调控作用
    1 材料
        1.1 慢病毒载体
        1.2 细胞株
        1.3 实验动物
        1.4 主要试剂
        1.5 主要仪器
        1.6 主要溶液的配制方法
    2 方法
        2.1 构建miR-551b-3p功能获得的细胞模型
        2.2 过表达miR-551b-3p后的体外功能实验
        2.3 过表达miR-551b-3p后的体内实验
        2.4 统计学处理
    3 结果
        3.1 胃癌细胞miR-551b-3p过表达模型的构建
        3.2 miR-551b-3p抑制胃癌细胞体外增殖
        3.3 miR-551b-3p促进胃癌细胞凋亡
        3.4 miR-551b-3p抑制胃癌细胞体外迁移和侵袭
        3.5 miR-551b-3p抑制胃癌细胞体内生长
    4 讨论
第三部分 miR-551b-3p参与胃癌发生发展的机制研究
    1 材料
        1.1 质粒
        1.2 细胞株
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
        1.5 主要溶液的配制方法
    2 方法
        2.1 miR-551b-3p靶基因的筛选
        2.2 荧光素酶报告基因系统检测miR-551b-3p与TMPRSS4的结合
        2.3 Westernblot检测miR-551b-3p对胃癌细胞中TMPRSS4表达的影响
        2.4 生物信息学预测miR-551b-3p相关的lncRNA
        2.5 荧光素酶报告基因系统检测lncRNASMARCC2与miR-551b-3p的结合
        2.6 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中lncRNASMARCC2的表达..
        2.7 Westernblot检测lncRNASMARCC2对胃癌细胞TMPRSS4表达的影响
        2.8 LncRNASMARCC2对胃癌细胞增殖、迁移的影响
        2.9 统计学处理
    3 结果
        3.1 miR-551b-3p的可能靶基因-TMPRSS
        3.2 TMPRSS4是miR-551b-3p的靶基因
        3.3 miR-551b-3p负性调控TMPRSS4的表达
        3.4 生物信息学筛选miR-551b-3p相关的lncRNA
        3.5 LncRNASMARCC2在胃癌细胞中高表达
        3.6 LncRNASMARCC2与miR-551b-3p相互结合
        3.7 LncRNASMARCC2负性调控miR-551b-3p的表达
        3.8 LncRNASMARCC2调控TMPRSS4的表达
        3.9 LncRNASMARCC2促进胃癌细胞体外增殖和迁移
    4 讨论
结论
参考文献
附录
英文缩略词索引
在学期间主要科研工作
文献回顾
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-551b-3p在胰腺癌细胞和组织中的表达及其临床意义[J]. 郭欣,吕小慧,吕行,陈勇,陈芦斌.  国际消化病杂志. 2016(06)
[2]miR-551b-3p在胃癌组织中低表达并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭[J]. 温馨,翟頔,王芳,余佳.  基础医学与临床. 2016(05)
[3]Evolutionary annotation of conserved long non-coding RNAs in major mammalian species[J]. BU DeChao,LUO HaiTao,JIAO Fei,FANG ShuangSang,TAN ChengFu,LIU ZhiYong,ZHAO Yi.  Science China（Life Sciences）. 2015(08)
[4]中国胃癌发病率及死亡率研究进展[J]. 邹文斌,李兆申.  中国实用内科杂志. 2014(04)
[5]我国胃癌防治研究三十年回顾[J]. 季加孚.  中国肿瘤临床. 2013(22)
[6]DNA and histone methylation in gastric carcinogenesis[J]. Danielle Queiroz Calcagno,Carolina Oliveira Gigek,Elizabeth Suchi Chen,Rommel Rodriguez Burbano,Marília de Arruda Cardoso Smith.  World Journal of Gastroenterology. 2013(08)
[7]利用芯片技术筛选肝癌早期复发密切相关的microRNA[J]. 黄冠群,孙建,简志祥,区应亮,侯宝华,区鑫锐.  实用医学杂志. 2011(10)

博士论文
[1]miR-107基因遗传变异与胃癌发生发展及预后的关联性研究及其分子机制探讨[D]. 王适之.南京医科大学 2012

硕士论文
[1]胃癌发生相关的miRNA的筛选及miR-196a的功能学研究[D]. 徐冬云.第二军医大学 2015
[2]原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用[D]. 邓治亮.南方医科大学 2012



本文编号：3605314