极性蛋白Par3对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移作用研究

发布时间：2017-05-16 16:02

  本文关键词：极性蛋白Par3对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨Par3蛋白在宫颈癌中的表达以及对宫颈癌细胞增殖与转移的作用。方法:通过免疫组织化学方法检测Par3蛋白在89例宫颈鳞癌中的表达水平。采用实时荧光定量PCR检测PARD3在HPV阳性宫颈癌SiHa细胞和HPV阴性宫颈癌C33A细胞中的本底表达。采用基因过表达和RNA干扰技术转染宫颈癌细胞系。运用实时荧光定量PCR和蛋白印迹技术检测PARD3 mRNA和Par3蛋白水平变化。Transwell小室体外实验检测其对SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响。流失细胞术研究其对SiHa细胞周期及凋亡的影响。结果:实时荧光定量PCR检测PARD3基因在SiHa和C33A细胞中的表达差异无统计学意义。免疫组化实验显示Par3蛋白在正常宫颈组织强表达,宫颈鳞癌组织中弱表达。QRT-PCR和Western blot检测提示SiHa细胞转染基因PARD3过表达质粒后mRNA和蛋白质表达水平显著增高,PARD3siRNA干扰SiHa细胞后PARD3mRNA和蛋白表达水平显著降低;Par3蛋白低表达诱导了EMT相关基因(N-cadherin,E-cadherin andβ-Catenin)的表达变化;Transwell小室体外实验表明Par3过表达组细胞侵袭、迁移能力明显低于对照组(P0.05),而低表达组(干扰组)细胞侵袭、迁移能力明显高于对照组(P0.01);流式细胞术结果显示与空白对照相比,PARD3基因被干扰后细胞被阻滞在S期,干扰组细胞凋亡率明显降低(P0.01);然而,上调PARD3的表达后细胞被阻滞在G0/G1期,过表达组细胞凋亡率明显增高(P0.01)。结论:Par3在宫颈癌中的缺失表达促进了癌细胞的增殖、侵袭及迁移的能力。
【关键词】：宫颈癌 Par3蛋白 迁移 侵袭
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-10
• ABSTRACT10-11
• 前言11-13
• 内容与方法13-28
• 1. 研究对象13-16
• 1.1 组织标本及细胞系来源13
• 1.2 干扰序列13
• 1.3 主要试剂13-14
• 1.4 相关试剂配制14-15
• 1.5 主要仪器15-16
• 2. 研究内容与方法16-27
• 2.1 免疫组织化学方法16-18
• 2.2 Si Ha细胞的培养18-19
• 2.3 PARD3 si RNA细胞转染19
• 2.4 PARD3基因过表达质粒的制备及转染19-21
• 2.5 转染后PARD3蛋白的Western blotting检测21-24
• 2.6 RT-PCR检测细胞转染后PARD3基因m RNA的表达24
• 2.7 流式细胞凋亡检测24-25
• 2.8 流式细胞周期检测25
• 2.9 Transwell小室体外迁移能力的测定25-26
• 2.10 Transwell小室体外侵袭能力的测定26
• 2.11 统计学分析26-27
• 3.技术路线图27-28
• 结果28-45
• 讨论45-49
• 小结49-50
• 致谢50-51
• 参考文献51-55
• 综述55-63
• 参考文献59-63
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文63-64
• 导师评阅表64

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本文编号：371260