stTRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的实验研究

发布时间：2017-05-18 00:01

  本文关键词：stTRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的和意义:利用化学还原法制备了聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体并研究其理化性质、表征参数及细胞毒性、转染效率。通过静电吸附作用将纳米金基因载体与含st TRAIL目的基因片段的重组质粒DNA按一定质量比结合构建了st TRAIL-纳米金复合物,并应用该复合物联合热休克处理肝癌细胞,观察其对热休克肝癌细胞的增殖活性、细胞凋亡等的影响,并探讨st TRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的相关机制。方法:1.利用化学还原法制备聚乙烯亚胺修饰的纳米金基因载体,用紫外分光光度计检测纳米金颗粒的吸收光谱及最大吸收峰处波长,在透射电镜下观察纳米金颗粒的表观形貌特征,用激光粒度仪检测纳米金颗粒的粒径大小及其分布,用表面电位仪检测纳米金颗粒的表面电位(Zeta电位),用1%的琼脂糖凝胶电泳实验检测纳米金基因载体与质粒DNA的结合稳定性,CCK-8试剂盒检测聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体及DNA-纳米金复合物对HEK293细胞的细胞毒性作用,通过荧光显微镜观察聚乙烯亚胺纳米基因载体介导p Ac GFP-N1在体外培养的HEK293细胞中的表达,并分析其转染效率。2.将纳米金基因载体与含stTRAIL目的基因片段的重组质粒DNA按不同质量比混合,1%琼脂糖凝胶电泳实验检测st TRAIL-纳米金复合物结合的稳定性,CCK-8试剂盒检测其对SMMC7721细胞的细胞毒性,确定纳米金与重组质粒DNA结合的最佳质量比。st TRAIL-纳米金复合物联合热休克处理肝癌细胞后,用CCK-8试剂盒检测其对肝癌细胞SMMC7721的增殖活性的影响,并用流式细胞术检测该复合物联合热休克处理肝癌细胞后促进肝癌细胞凋亡的作用。3.Real-time PCR和Western blot分别检测TRAIL信号通路下游Caspase-8、Caspase-3的mRNA、蛋白质水平的表达差异,探讨st TRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的相关机制。结果:1.聚乙烯亚胺还原氯金酸可以得到表面带正电荷的纳米金颗粒,呈单分散球形分布,其粒径为12.3±3.3 nm。在PH=7.2时,Zeta电位为+(29.7±5.1)m V。1%琼脂糖凝胶电泳实验结果表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,质粒DNA可完全结合到纳米金表面。体外转染实验表明,聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体能介导p Ac GFP-N1转染HEK293细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白,其转染效率可达25%。2.琼脂糖凝胶电泳实验表明,当纳米金/质粒DNA≥0.5时,重组质粒DNA可完全结合到纳米金颗粒表面。CCK-8试验表明,纳米金与重组质粒DNA按质量比5:1结合时形成的复合物相对稳定,且对细胞毒性较弱,最适合转染st TRAIL基因。用按此比例结合的stTRAIL-纳米金复合物联合热休克处理肝癌细胞,能明显抑制肝癌细胞增殖活性,显著地促进肝癌细胞凋亡。3.Real-time PCR结果表明,经过st TRAIL-纳米金复合物联合热休克处理的肝癌细胞组,TRAIL信号通路下游Caspase-8、Caspase-3的mRNA表达明显增高。Western blot结果同样表明,实验组TRAIL信号信号通路下游Caspase-8、Caspase-3等蛋白质表达明显上调。结论:通过化学合成的纳米金基因载体具备制备简便、成本低、转染效率较高的特点。2.st TRAIL-纳米金复合物按质量比5:1结合较稳定,能够转染st TRAIL基因。该复合物能够在热休克条件下能够显著地抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。3.st TRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡可能是通过纳米金载体递送TRAIL基因,使TRAIL基因过表达,上调TRAIL信号通路,促使下游凋亡相关分子Caspase-8、Caspase-3等表达增加,从而促进肝癌细胞凋亡。
【关键词】：肝癌 TRAIL 纳米金 热休克 凋亡
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-15
• 1.1 研究背景12
• 1.2 研究意义12-13
• 1.3 可行性分析13-14
• 1.4 研究方法14
• 1.5 统计学分析14-15
• 第二章 聚乙烯亚胺修饰纳米金基因载体的制备及鉴定15-25
• 2.1 引言15-16
• 2.2 材料与方法16-18
• 2.3 实验方法18-19
• 2.4 结果19-23
• 2.5 讨论23-24
• 2.6 结论24-25
• 第三章 stTRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的实验研究25-45
• 3.1 引言25
• 3.2 材料与方法25-29
• 3.3 实验方法29-37
• 3.4 实验结果37-43
• 3.5 讨论43-44
• 3.6 结论44-45
• 全文总结45-46
• 参考文献46-50
• 文献综述 TRAIL在肝癌治疗中的应用进展50-57
• 参考文献54-57
• 攻读学位期间取得的主要研究成果57-58
• 致谢58

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张阳德,罗育林;纳米科技——21世纪社会发展的推进器[J];中国医学工程;2003年06期

2 ;我国在核酸药物的纳米载运体系研究中取得进展[J];功能材料信息;2012年01期

3 于菲菲;王新霞;邹豪;张国庆;钟延强;;三种不同功能化纳米金的制备及其稳定性比较[J];第二军医大学学报;2013年11期

4 孔小丽;乔飞燕;齐晖;李富荣;周汉新;;抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物探针的制备及性能分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年05期

5 李红红;陈兴国;;纳米金银材料在比色检测汞中的应用[J];岩矿测试;2012年05期

6 郭常闰;关树文;黄磊;张超;董彪;宋宏伟;王丽萍;;次血红素六肽对纳米金诱导线虫热激损伤的保护作用[J];吉林大学学报(理学版);2012年01期

7 ;纳米金壳新材料可有效抑癌[J];功能材料信息;2012年01期

8 李宁;骆小平;高飞;;复合纳米金膜技术增强牙科钛瓷结合的基础研究[J];口腔材料器械杂志;2014年03期

9 吴维明,蔡强,陈裕泉;纳米金在生物检测中的应用[J];国外医学.生物医学工程分册;2003年05期

10 ;纳米金壳新材料可有效抑癌[J];技术与市场;2013年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 廉学明;金洁;田佳;赵汉英;;具有温度响应可逆收缩的纳米金球簇[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集（上册）[C];2009年

2 李传新;潘春旭;;纳米科技现状及展望[A];中南地区第十六届电子显微镜学术交流会论文集[C];2007年

3 何微娜;林丰;郭祥群;;自旋标记-发光纳米金多模式探针研究[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

4 余玲;张彦峥;王亚丹;张银堂;徐茂田;;非标记纳米金光谱法检测雌激素[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

5 郭彬;李青山;;纳米功能性纺织品的最新研究进展[A];雪莲杯第10届功能性纺织品及纳米技术应用研讨会论文集[C];2010年

6 贾文峰;李津如;林官华;江龙;;简单方法制备单分散纳米金花及其表面拉曼增强应用[A];中国化学会第十三届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2011年

7 李竟先;鄢程;吴基球;;纳米颗粒制备过程中的机械力化学效应[A];纳米材料和技术应用进展——全国第二届纳米材料和技术应用会议论文集（上卷）[C];2001年

8 唐芳琼;;尺寸、结构、形貌可控纳米颗粒制备与调变技术开发[A];纳微粉体制备与应用进展——2002年纳微粉体制备与技术应用研讨会论文集[C];2002年

9 李军;纪小慧;洪霞;王连英;贾若昆;菅文平;白玉白;;基于纳米晶特性的免疫检测研究[A];2003年纳米和表面科学与技术全国会议论文摘要集[C];2003年

10 袭著革;;纳米毒理学研究进展[A];中国毒理学会环境与生态毒理学专业委员会成立大会会议论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 刘俊;“纳米食品”安全存疑[N];广州日报;2010年

2 张阳德;我国纳米生物医药科技发展的战略思考[N];科技日报;2003年

3 本报记者 童岱;刘扬：发现“神水”之毒[N];北京科技报;2009年

4 本报记者 贾书哲;拨开迷雾看纳米[N];中国质量报;2002年

5 何屹;纳米金晶簇的催化活性与大小有关[N];科技日报;2008年

6 本报记者 李胜;一吨值一亿美元[N];深圳商报;2002年

7 李树龙;小纳米 大神通（上篇）[N];中国黄金报;2001年

8 记者　任荃;纳米金球让基因拷贝不走样[N];文汇报;2006年

9 中国包装联合会纸委会副秘书长 陈希荣;微观色彩学与包装设计应用[N];中国包装报;2010年

10 张唯诚;显微世界中的DNA纳米机器人[N];大众科技报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 冯永海;Au、Ag、Pd、Cu、Ni纳米催化剂设计构筑与催化氧化还原研究[D];江苏大学;2015年

2 陈娜;纳米金对胶质瘤放射增敏作用的研究[D];苏州大学;2015年

3 杨洁;宽频纳米结构光天线特性的研究[D];山东大学;2015年

4 张晶;新型纳米生物探针的构建及其应用[D];北京理工大学;2015年

5 陈坤;功能化纳米金光学分子探针的构建及其用于三聚氰胺和转基因分析检测[D];华中农业大学;2013年

6 秦为为;等离子纳米粒子在可视化成像检测及纳米马达中的应用[D];中国科学院研究生院(上海应用物理研究所);2016年

7 董海峰;DNA检测与细胞内microRNA分析新方法研究[D];南京大学;2011年

8 张守仁;纳米金和二氧化钛基复合材料的可控合成、性质和催化应用研究[D];郑州大学;2016年

9 李群芳;多功能纳米标记探针作为信号放大电化学免疫传感器研究[D];福州大学;2014年

10 胡宇芳;基于核酸和类核酸的电化学生物传感器的研究及应用[D];湖南大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 寇瑞花;壳聚糖基金纳米棒的构建及其纳米药物载体的研究[D];北京协和医学院;2015年

2 何路伟;染料敏化的氧化锌“纳米草坪”的构建及其光催化制氢性能[D];上海应用技术学院;2015年

3 熊海岩;钯、铂、金基纳米催化剂的制备及其性能研究[D];山东大学;2015年

4 席春晓;棒状金纳米晶及类球形银纳米晶的可控制备与性能研究[D];山东大学;2015年

5 谢芳;择优腐蚀制备新颖金铂异质纳米结构[D];山东大学;2015年

6 梁莹;Anti-cMet抗体耦合空心纳米金球对宫颈癌光热治疗增敏之作用研究[D];山东大学;2015年

7 刘晶;纳米金—声致发光分析方法研究[D];陕西师范大学;2015年

8 何逸鹏;纳米金与不同亚型乳腺癌细胞相互作用的初步研究[D];福建师范大学;2015年

9 韦正楠;基于富勒烯@金纳米等离子体的Fenton催化传感器研究[D];重庆大学;2015年

10 潘欢欢;一维半导体纳米结构可控制备及其光电探测器的研究[D];苏州大学;2015年

  本文关键词：stTRAIL-纳米金复合物促进热休克肝癌细胞凋亡的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：374712