缺氧微环境中AQP9表达的变化对肝细胞肝癌的增殖的影响及机制的研究

发布时间：2023-03-11 15:59

　　目的:研究水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)如何参与肝细胞肝癌缺氧微环境中癌细胞的缺氧应答,并初步探讨其可能的机制。方法:(第一部分)本实验采用低氧三气培养箱培养构建SMMC-7721和Huh-7细胞缺氧模型。应用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测SMMC-7721和Huh-7细胞AQP9的mRNA和Huh-7细胞的AQP9蛋白质的表达随着缺氧时间的变化情况。应用重组慢病毒感染SMMC-7721和Huh-7细胞,构建AQP9过表达细胞株(SMMC-7721-AQP9和Huh-7-AQP9),以空载体LV-PWPI作为阴性对照(SMMC-7721-PWPI和Huh-7-PWPI),然后通过si RNA-AQP9干扰过表达AQP9细胞中的AQP9(SMMC-7721-AQP9-siAQP9和Huh-7-AQP9-si AQP9),siNC作为对照(SMMC-7721-AQP9-si NC和Huh-7-AQP9-siNC)。通过蛋白质印迹法和细胞免疫荧光激光共聚焦检测病毒转染的细胞AQP9的蛋白质的表达水平和定位。通过细胞增殖活性检测法(Cell Counting Kit-8,C...

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【学位级别】：硕士

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英文摘要
前言
第一部分 细胞层面研究缺氧微环境中AQP9对肝癌SMMC-7721 和Huh-7 细胞的增殖和侵袭的影响及其可能的机制
    1.材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 主要实验仪器、器材
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要试剂的配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞复苏、培养、冻存
            1.2.2 慢病毒转染肝癌SMMC-7721 和Huh-7 细胞株
            1.2.3 细胞RNA的提取、逆转录c DNA的合成和q RT-PCR
            1.2.4 实时荧光定量PCR
            1.2.5 细胞总蛋白的提取和蛋白浓度测定
            1.2.6 Western Blot
            1.2.7 细胞缺氧模型的建立
            1.2.8 细胞侵袭实验
            1.2.9 CCK-8 法细胞增殖实验
            1.2.10 细胞免疫荧光
            1.2.11 si RNA的转染
            1.2.12 Elisa
            1.2.13 统计学方法
    2 结果
        2.1 细胞缺氧模型的构建
        2.2 缺氧诱导Huh-7 细胞中AQP9表达降低
        2.3 在常氧状态下，构建过表达 AQP9 的 SMMC-7721-AQP9 和Huh-7-AQP9 细胞
        2.4 在缺氧微环境中 AQP9 对 SMMC-7721 和 Huh-7 细胞增殖和侵袭的抑制作用强于常氧状态
        2.5 低氧微环境中 AQP9 过表达可抑制 SMMC-7721 和 Huh-7 细胞HIF-1α的表达
        2.6 低氧微环境中表达增加的 AQP9 可抑制 SMMC-7721 和 Huh-7 细胞核内 HIF-1α的表达
第二部分 通过免疫组织化学研究AQP9与HIF-1α在肝癌人体标本中表达的相关性
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 标本的收集
            1.1.2 主要实验设备
            1.1.3 主要实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 免疫组织化学法
            1.2.2 统计学方法
    2 结果
第三部分 动物皮下成瘤内实验研究表达增高的AQP9对肝癌细胞裸鼠皮下成瘤和HIF-1α表达的影响
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 细胞和动物
            1.1.2 主要实验仪器设备
            1.1.3 主要实验试剂
            1.1.4 主要溶液的配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 裸鼠皮下成瘤实验
    2 结果
        2.1 裸鼠皮下成瘤瘤体的观察及表达增加的AQP9对裸鼠皮下成瘤率及生长速度的影响
        2.2 裸鼠皮下成瘤瘤体的免疫组织化学法检测结果
    3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
硕士期间发表文章



本文编号：3759816