LukS-PV诱导人单核细胞白血病THP-1细胞分化及其机制研究

发布时间：2023-03-19 12:44

　　目的：LukS-PV是金黄色葡萄球菌分泌的PV-杀白细胞素(Panton-Valentine leucocidin,PVL)两个组分之一,本课题前期研究发现重组LukS-PV在体外具有抗白血病效应。本课题进一步研究LukS-PV对人单核细胞白血病THP-1的诱导分化作用,并探讨其作用机制,为寻求白血病新的靶向治疗药物奠定基础。方法：体外培养THP-1细胞,分别采用0,0.50,1.00,1.50μM LukS-PV刺激细胞24和48 h。(1)倒置显微镜、瑞氏-吉萨姆染色镜检等方法观察LukS-PV作用前后细胞的形态学变化；(2)流式细胞术检测细胞表面特异性抗原CD11b, CD14;(3)荧光显微镜观察细胞吞噬功能；(4)Transwell方法检测细胞迁移和侵袭能力；(5)Western blotting检测MAPK通路相关蛋白及其磷酸化表达；(6) P38, JNK, ERK通路抑制剂干预处理,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原CDllb, CD14。结果：(1)经LukS-PV刺激的THP-1细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁,且呈梭形。细胞体积增大,胞质增多,核质比例缩小,细胞核呈...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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ABSTRACT
1 前言
2 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要试剂配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 LukS-PV蛋白表达和纯化
        2.2.3 蛋白定量
        2.2.4 细胞总蛋白的提取
        2.2.5 细胞形态学观察
        2.2.6 细胞表面分化抗原检测
        2.2.7 细胞吞噬功能检测
        2.2.8 Transwell检测细胞侵袭和迁移
        2.2.9 Western blotting检测相关蛋白
    2.3 统计学处理
3 结果
    3.1 细胞形态学观察
    3.2 细胞表面抗原CD11b和CD14的表达
    3.3 细胞吞噬功能的检测
    3.4 细胞侵袭和迁移能力的检测
    3.5 MAPK通路相关蛋白及磷酸化表达
    3.6 转录因子及磷酸化表达
    3.7 P38,JNK,ERK通路抑制剂对LukS-PV诱导的THP-1分化影响
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3765268