TGF-β1诱导CAFs形成促进乳腺癌侵袭转移的机制研究
发布时间：2024-05-18 12:16
背景:乳腺癌是一种威胁全球女性生命健康的恶性肿瘤,而恶性肿瘤的标志之一是肿瘤侵袭转移,肿瘤患者90%以上的致死率都是由转移引起的。乳腺癌是一种由肿瘤细胞和间质细胞等组成的高度复杂的微环境系统,肿瘤细胞能产生高水平的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),作用于基质成纤维细胞使其产生氧化应激进而影响肿瘤细胞基因组的稳定性;间质细胞能够通过分泌一些生长因子来调节肿瘤的发生发展,并在肿瘤的发生发展以及转移过程中发挥着重要的作用。成纤维细胞能够在肿瘤微环境中被激活并转化为肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-Associated Fibroblasts,CAFs),CAFs是肿瘤间质中最丰富的细胞成分,能够通过启动肿瘤细胞上皮间质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)促进肿瘤的增殖、侵袭和转移,但是其具体机制尚不明确。EMT被认为是肿瘤侵袭转移的关键步骤,转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路是肿瘤细胞发生EMT的经典通路,TGF-β1还是潜在的自噬激活剂,能够促进纤维化的产生。课题组前期研究发现,TGF-β1能诱导血...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
1.1 乳腺癌微环境
1.1.1 局部微环境
1.1.2 转移性微环境
1.1.3 氧化应激改变乳腺癌微环境
1.2 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)
1.2.1 CAFs的起源和特性
1.2.2 乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)在乳腺癌发生发展中的作用
1.2.3 CAFs通过上皮间质转换(EMT)促进肿瘤转移
1.3 TGF-β
1.3.1 TGF-β1在肿瘤发生、发展和转移中的作用
1.3.2 TGF-β1与自噬
1.3.2.1 自噬和自噬对肿瘤的影响
1.3.2.2 TGF-β1通过自噬影响肿瘤的发生和发展
1.3.3 TGF-β1与CAFs
1.4 立题依据
第2章 成纤维细胞NIH3T3氧化应激细胞模型模拟肿瘤微环境的构建
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器与设备
2.2 方法
2.2.1 主要工作液的配制
2.2.2 细胞的复苏、传代和冻存
2.2.3 MTS细胞毒性实验测定成纤维细胞NIH3T3的存活率
2.2.4 酶标仪测定成纤维细胞NIH3T3 MDA(丙二醛)含量
2.2.5 成纤维细胞NIH3T3 SOD(超氧化物歧化酶)活力测定
2.2.6 流式细胞术检测成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS
2.2.7 数据处理及分析
2.3 实验结果
2.3.1 H2O2对成纤维细胞NIH3T3存活率的影响
2.3.2 H2O2对成纤维细胞NIH3T3 MDA含量及SOD活力的影响
2.3.3 H2O2对成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS水平的影响
2.4 小结与讨论
第3章 TGF-β1缓解氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3的损伤并促进其向CAFs的转化
3.1 材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 主要试剂与材料
3.1.3 主要仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 主要工作液的配制
3.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
3.2.3 MTS细胞毒性实验测定成纤维细胞NIH3T3存活率
3.2.4 MDA含量测定
3.2.5 SOD活力测定
3.2.6 流式细胞术测定成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS
3.2.7 RT-qPCR检测CAFs标志物α-SMA/FAP-α/Cav-1 mRNA表达水平
3.2.8 Western blotting法检测CAFs标志物α-SMA/FAP-α/Cav-1的蛋白表达水平
3.2.9 数据处理与统计分析
3.3 结果
3.3.1 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3增殖的影响
3.3.2 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 MDA含量与SOD活力的影响
3.3.3 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS水平的影响
3.3.4 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 α-SMA/ FAP-α/Cav-1 mRNA表达的影响
3.3.5 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 α-SMA/ FAP-α/Cav-1 蛋白表达的影响
3.4 小结与讨论
第4章 TGF-β1通过自噬诱导氧化应激条件下成纤维细胞NIH3T3向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的转化
4.1 材料
4.1.1 细胞株
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器与设备
4.2 方法
4.2.1 主要溶液的配制
4.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
4.2.3 RT-qPCR检测自噬标志物Beclin1及LC3β mRNA表达水平
4.2.4 Western blotting法检测自噬标志物Beclin1及LC3β的蛋白表达水平
4.2.5 透射电镜观察成纤维细胞NIH3T3的自噬结构
4.2.6 激光共聚焦检测CAFs标志物FAP-α与自噬标志物LC3β共定位
4.2.7 数据处理与统计分析
4.3 结果
4.3.1 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 Beclin1及LC3βmRNA表达的影响
4.3.2. TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 Beclin1及LC3β蛋白表达的影响
4.3.3 TGF-β1增加了氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3自噬小体的产生
4.3.4 TGF-β1增强了氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 FAP-α与LC3β的共定位
4.4 小结与讨论
第5章 成纤维细胞NIH3T3与小鼠乳腺癌细胞4T1共培养模型模拟肿瘤微环境的构建
5.1 材料
5.1.1 细胞株
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器与设备
5.2 方法
5.2.1 主要溶液的配制
5.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
5.2.3 细胞划痕实验考察细胞迁移能力
5.2.4 细胞迁移实验检测肿瘤细胞转移数
5.2.5 细胞侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭数
5.2.6 数据处理与统计分析
5.3 结果
5.3.1 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进小鼠乳腺癌细胞4T1的迁移
5.3.2 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进小鼠乳腺癌细胞4T1的侵袭转移
5.4 小结与讨论
第6章 TGF-β1通过诱导CAFs形成启动EMT从而促进小鼠乳腺癌细胞4T1的侵袭转移
6.1 材料
6.1.1 细胞株
6.1.2 主要试剂与材料
6.1.3 主要仪器与设备
6.2 方法
6.2.1 主要溶液的配制
6.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
6.2.3 Western Blotting检测EMT标志物E-Cadherin及N-Cadherin蛋白表达
6.2.4 siRNA特异性干扰FAP-α的表达
6.2.5 RT-qPCR和Western Blotting法检测FAP-α干扰效果
6.2.6 细胞迁移实验检测肿瘤细胞的迁移数
6.2.7 细胞侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭数
6.2.8 数据处理与统计分析
6.3 结果
6.3.1 CAFs对4T1细胞E-Cadherin和N-Cadherin蛋白表达的影响
6.3.2 siRNA FAP-α后显著降低FAP-α mRNA和蛋白的表达水平
6.3.3 siRNA FAP-α后,细胞共培养后CAFs对4T1细胞侵袭转移的影响
6.3.4 siRNA FAP-α后,细胞共培养后4T1细胞发生EMT逆转
6.4 小结与讨论
第7章 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种移植瘤模型的建立
7.1 材料
7.1.1 细胞株及动物
7.1.2 主要试剂
7.1.3 主要仪器与设备
7.2 方法
7.2.1 主要溶液的配制
7.2.2 细胞培养、传代、冻存
7.2.3 检测小鼠移植瘤大小
7.2.4 HE染色检测肿瘤组织坏死及肺转移情况
7.2.5 RT-qPCR检测CAFs标志物、自噬标志物及EMT标志物mRNA的表达
7.2.6 Western blotting检测EMT标志物蛋白表达
7.2.7 数据处理及结果分析
7.3 结果
7.3.1 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤的生长
7.3.2 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种减少了肿瘤坏死
7.3.3 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种丰富了CAFs标志物mRNA的表达
7.3.4 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种丰富了自噬标志物mRNA的表达
7.3.5 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤细胞上皮间质(EMT)的转变
7.3.6 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤向肺转移
7.4 小结与讨论
第8章 结论与展望
8.1 结论
8.2 展望
致谢
参考文献
综述
参考文献
本文编号：3976920
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
1.1 乳腺癌微环境
1.1.1 局部微环境
1.1.2 转移性微环境
1.1.3 氧化应激改变乳腺癌微环境
1.2 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)
1.2.1 CAFs的起源和特性
1.2.2 乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)在乳腺癌发生发展中的作用
1.2.3 CAFs通过上皮间质转换(EMT)促进肿瘤转移
1.3 TGF-β
1.3.1 TGF-β1在肿瘤发生、发展和转移中的作用
1.3.2 TGF-β1与自噬
1.3.2.1 自噬和自噬对肿瘤的影响
1.3.2.2 TGF-β1通过自噬影响肿瘤的发生和发展
1.3.3 TGF-β1与CAFs
1.4 立题依据
第2章 成纤维细胞NIH3T3氧化应激细胞模型模拟肿瘤微环境的构建
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器与设备
2.2 方法
2.2.1 主要工作液的配制
2.2.2 细胞的复苏、传代和冻存
2.2.3 MTS细胞毒性实验测定成纤维细胞NIH3T3的存活率
2.2.4 酶标仪测定成纤维细胞NIH3T3 MDA(丙二醛)含量
2.2.5 成纤维细胞NIH3T3 SOD(超氧化物歧化酶)活力测定
2.2.6 流式细胞术检测成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS
2.2.7 数据处理及分析
2.3 实验结果
2.3.1 H2O2对成纤维细胞NIH3T3存活率的影响
2.3.2 H2O2对成纤维细胞NIH3T3 MDA含量及SOD活力的影响
2.3.3 H2O2对成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS水平的影响
2.4 小结与讨论
第3章 TGF-β1缓解氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3的损伤并促进其向CAFs的转化
3.1 材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 主要试剂与材料
3.1.3 主要仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 主要工作液的配制
3.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
3.2.3 MTS细胞毒性实验测定成纤维细胞NIH3T3存活率
3.2.4 MDA含量测定
3.2.5 SOD活力测定
3.2.6 流式细胞术测定成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS
3.2.7 RT-qPCR检测CAFs标志物α-SMA/FAP-α/Cav-1 mRNA表达水平
3.2.8 Western blotting法检测CAFs标志物α-SMA/FAP-α/Cav-1的蛋白表达水平
3.2.9 数据处理与统计分析
3.3 结果
3.3.1 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3增殖的影响
3.3.2 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 MDA含量与SOD活力的影响
3.3.3 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3活性氧ROS水平的影响
3.3.4 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 α-SMA/ FAP-α/Cav-1 mRNA表达的影响
3.3.5 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 α-SMA/ FAP-α/Cav-1 蛋白表达的影响
3.4 小结与讨论
第4章 TGF-β1通过自噬诱导氧化应激条件下成纤维细胞NIH3T3向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的转化
4.1 材料
4.1.1 细胞株
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器与设备
4.2 方法
4.2.1 主要溶液的配制
4.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
4.2.3 RT-qPCR检测自噬标志物Beclin1及LC3β mRNA表达水平
4.2.4 Western blotting法检测自噬标志物Beclin1及LC3β的蛋白表达水平
4.2.5 透射电镜观察成纤维细胞NIH3T3的自噬结构
4.2.6 激光共聚焦检测CAFs标志物FAP-α与自噬标志物LC3β共定位
4.2.7 数据处理与统计分析
4.3 结果
4.3.1 TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 Beclin1及LC3βmRNA表达的影响
4.3.2. TGF-β1对氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 Beclin1及LC3β蛋白表达的影响
4.3.3 TGF-β1增加了氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3自噬小体的产生
4.3.4 TGF-β1增强了氧化应激状态下成纤维细胞NIH3T3 FAP-α与LC3β的共定位
4.4 小结与讨论
第5章 成纤维细胞NIH3T3与小鼠乳腺癌细胞4T1共培养模型模拟肿瘤微环境的构建
5.1 材料
5.1.1 细胞株
5.1.2 主要试剂
5.1.3 主要仪器与设备
5.2 方法
5.2.1 主要溶液的配制
5.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
5.2.3 细胞划痕实验考察细胞迁移能力
5.2.4 细胞迁移实验检测肿瘤细胞转移数
5.2.5 细胞侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭数
5.2.6 数据处理与统计分析
5.3 结果
5.3.1 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进小鼠乳腺癌细胞4T1的迁移
5.3.2 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进小鼠乳腺癌细胞4T1的侵袭转移
5.4 小结与讨论
第6章 TGF-β1通过诱导CAFs形成启动EMT从而促进小鼠乳腺癌细胞4T1的侵袭转移
6.1 材料
6.1.1 细胞株
6.1.2 主要试剂与材料
6.1.3 主要仪器与设备
6.2 方法
6.2.1 主要溶液的配制
6.2.2 细胞的复苏、传代、冻存
6.2.3 Western Blotting检测EMT标志物E-Cadherin及N-Cadherin蛋白表达
6.2.4 siRNA特异性干扰FAP-α的表达
6.2.5 RT-qPCR和Western Blotting法检测FAP-α干扰效果
6.2.6 细胞迁移实验检测肿瘤细胞的迁移数
6.2.7 细胞侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭数
6.2.8 数据处理与统计分析
6.3 结果
6.3.1 CAFs对4T1细胞E-Cadherin和N-Cadherin蛋白表达的影响
6.3.2 siRNA FAP-α后显著降低FAP-α mRNA和蛋白的表达水平
6.3.3 siRNA FAP-α后,细胞共培养后CAFs对4T1细胞侵袭转移的影响
6.3.4 siRNA FAP-α后,细胞共培养后4T1细胞发生EMT逆转
6.4 小结与讨论
第7章 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种移植瘤模型的建立
7.1 材料
7.1.1 细胞株及动物
7.1.2 主要试剂
7.1.3 主要仪器与设备
7.2 方法
7.2.1 主要溶液的配制
7.2.2 细胞培养、传代、冻存
7.2.3 检测小鼠移植瘤大小
7.2.4 HE染色检测肿瘤组织坏死及肺转移情况
7.2.5 RT-qPCR检测CAFs标志物、自噬标志物及EMT标志物mRNA的表达
7.2.6 Western blotting检测EMT标志物蛋白表达
7.2.7 数据处理及结果分析
7.3 结果
7.3.1 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤的生长
7.3.2 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种减少了肿瘤坏死
7.3.3 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种丰富了CAFs标志物mRNA的表达
7.3.4 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种丰富了自噬标志物mRNA的表达
7.3.5 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤细胞上皮间质(EMT)的转变
7.3.6 小鼠乳腺癌细胞4T1与成纤维细胞NIH3T3混合接种促进肿瘤向肺转移
7.4 小结与讨论
第8章 结论与展望
8.1 结论
8.2 展望
致谢
参考文献
综述
参考文献
本文编号：3976920
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3976920.html
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