BRD4-DNA相互作用促进双共价的染色质结合

发布时间：2024-12-17 23:39

　　 溴结构域蛋白4(bromodomain protein 4, BRD4)是BET蛋白质家族成员,在哺乳细胞中广泛表达,在整个有丝分裂周期内始终与染色质结合。BRD4通过招募不同的染色质调节因子到染色质上,影响染色质结构或重塑,从而调控基因表达,影响细胞周期,所以在基因转录、DNA复制和修复过程中十分重要。研究表明,BRD4在蛋白质水平的表达失调与肺癌、乳腺癌、急性髓系淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌等多种肿瘤的发生发展相关,因此,BRD4是重要的药物靶标。本研究对BRD4蛋白与DNA结合的作用关系进行了探索。构建了BRD4不同结构域的截短体,表达纯化相应的蛋白质片段。通过电泳迁移率变动分析(EMSA)、荧光偏振(FA)和核磁共振滴定(NMR-HSQC)等多种技术,检测BRD4与DNA结合的作用区域,发现BRD4可通过有序结构和无序区域与DNA结合,这种作用与DNA的核苷酸序列无关。BRD4蛋白的磷酸化能够明显地降低BRD4结合DNA的能力。另用免疫荧光观察到BRD4蛋白能在细胞内形成液态特性的核斑点(nuclear puncta)。BRD4核斑点对小分子化合物或者高盐浓度敏感,符合液液相分离的...

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 蛋白质体外表达与纯化
    1.3 双链DNA的制备
    1.4 生物素标记的双链DNA的合成
    1.5 电泳迁移率变动分析(EMSA)
    1.6 荧光偏振(FA)检测
    1.7 核磁共振(NMR)滴定
    1.8 免疫荧光鉴定
    1.9 蛋白质磷酸化
    1.10 统计学方法
2 结果
    2.1 BRD4蛋白的N末端能结合DNA
    2.2 溴结构域以及无序结构区域对DNA亲和力的影响
    2.3 BRD4蛋白与DNA的结合可以促进BRD4蛋白的液态相分离以及染色质聚集
3 讨论



本文编号：4016706