TAB3通过激活TAK1-STAT3信号通路上调PIM1的表达促进结直肠癌增殖的研究

发布时间：2025-02-05 10:47

　　研究背景和目的:肿瘤细胞的高增殖能力是结直肠癌患者预后不良的主要原因之一。研究表明TAB3和PIM-1在结直肠癌的发生发展中,特别是在促进肿瘤的增殖中起重要作用,然而TAB3和PIM-1在结直肠癌中的关系及它们在促进结直肠癌发生和发展中的作用仍不清楚。本研究拟先检测结直肠癌组织中TAB3和PIM-1的表达,并对其相关性进行分析;其次通过体外和体内研究明确TAB3通过调控PIM-1表达对结直肠癌增殖生物学特性的影响;最后探讨TAB3调控PIM-1的分子生物学机制。方法:1、运用免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot方法检测180例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表达水平,并利用散点图分析两者的相关性。通过qRT-PCR和Western blot的方法检测六种不同结直肠癌细胞株中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表达水平,并观察两者的相关性;2、降低结直肠癌细胞中TAB3的表达,通过qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中PIM-1 mRNA和蛋白表达变化,然后利用平板克隆和EDU两种实验观察正常表达TAB3及沉默TAB3...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
前言
第1章 结直肠癌组织和细胞中TAB3、PIM-1的表达及其相关性分析
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 细胞培养
        3 蛋白免疫印迹反应(Western blot)
        4 RNA的提取及聚合酶链反应(PCR)
        5 ElivisionTMplus免疫组织化学法
        6 统计学分析
    结果
        1 在结直肠癌组织中检测TAB3与PIM-1的表达情况
        2 TAB3和PIM-1基因在结直肠癌组织中表达的关联性分析
        3 结直肠癌细胞株中TAB3和PIM-1的表达情况
    讨论
    结论
第2章 TAB3调控PIM-1表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响
    引言
    第一节 通过体外和体内实验观察沉默TAB3的表达对PIM-1表达及结直肠癌细胞增殖能力的影响
        材料与方法
            1 材料
            2 细胞培养
            3 shTAB3质粒的构建
            4 RNA的提取及实时荧光定量PCR
            5 蛋白免疫印迹反应(Western blot)
            6 平板克隆实验步骤
            7 EDU实验步骤
            8 结直肠癌稳转细胞系构建
            9 动物实验
            10 统计学分析
            11 TAB3 干扰质粒的筛选
            12 降低结直肠癌细胞中 TAB3 的表达,观察 PIM-1 的表达变化
    第二节 PIM-1是TAB3调节结直肠癌细胞增殖的关键效应分子
        1 材料
        2 细胞培养
        3 pcDNA3.1(+)-TAB3、pcDNA3.1(+)-PIM-1及shPIM-1重组质粒的构建
        4 RNA的提取及实时荧光定量PCR
        5 蛋白免疫印迹反应(Western blot)
        6 平板克隆实验步骤
        7 EDU实验步骤
        8 动物实验
        9 统计学分析
    结果
        1.PIM-1干扰质粒的筛选
        2.HA-PIM1双His-TAB3质粒的表达
        3.PIM-1是TAB3介导结直肠癌细胞增殖的关键分子
    讨论
    结论
第3章 TAB3调控PIM-1表达机制的研究
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 细胞培养
        3. shTAK1质粒的构建
        4 RNA的提取及实时荧光定量PCR
        5 蛋白免疫印迹反应(Western blot)
        6 免疫组织化学(IHC)
        7 荧光素酶报告基因实验
        8 激光共聚焦免疫荧光实验
        9 免疫共沉淀
        10 统计学分析
    结果
        1.TAK1干扰质粒的筛选
        2. TAB3通过STAT3通路调控PIM-1的表达进而调控结直肠癌细胞的增殖
        3. 在结直肠癌组织中检测TAB3与p-STAT3(Tyr705)蛋白的表达情况
        4. TAB3通过与STAT3直接结合而非JAK2调节STAT3活性
        5. TAB3通过形成TAB3-TAK1复合物激活STAT3信号通路
    讨论
    结论
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4029716