ASPP2及其异构体ΔASPP2对结肠癌细胞自噬及凋亡影响

发布时间：2017-06-21 19:08

  本文关键词：ASPP2及其异构体ΔASPP2对结肠癌细胞自噬及凋亡影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的结肠癌为常见的消化系统恶性肿瘤之一,超过半数以上的结肠癌患者具有P53基因突变或缺失。P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of P53,ASPP2)在P53基因选择性诱导细胞凋亡中起着重要作用,ASPP2能够通过P53依赖途径促进细胞凋亡,从而抑制肿瘤的发生及发展。ΔASPP2是通过5’RACE技术发现的一种新的、被截短的、含有880个氨基酸的ASPP2异构体。初步研究显示ΔASPP2不仅能抑制细胞凋亡,也能促进细胞自噬,同时在临床结肠癌标本中也发现ΔASPP2表达显著增高。本课题旨在探讨ASPP2及其异构体ΔASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌HCT116 P53-/-(P53缺失型)细胞凋亡和自噬的影响,并深入探讨ΔASPP2对ASPP2与P53引起的细胞自噬及凋亡的影响及其相关机制。方法结肠癌及癌旁正常组织冰冻切片处理,经包埋及固定后,利用免疫荧光技术检测结肠癌及癌旁组织中ASPP2与P53的表达情况;提取结肠癌标本及癌旁组织RNA,随后经逆转录为c DNA,并利用ASPP2、ΔASPP2与P53引物进行PCR扩增,使用实时荧光定量PCR技术检测结肠癌标本及癌旁组织中ASPP2 m RNA、ΔASPP2 m RNA与P53 m RNA表达水平;使用ASPP2、ΔASPP2及P53质粒转染HCT116-/-细胞,同时转染绿色荧光GFP-LC3质粒至各组细胞中,利用化疗药物奥沙利铂(L-OHP)处理后利用荧光显微镜观察细胞自噬水平;利用M30、Calcein AM/PI染色与流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平;利用MTT法检测不同处理组细胞相对存活率;使用r Ad-ASPP2、r Ad-ΔASPP2与r Ad-53感染HCT116-/-细胞,经L-OHP处理后,利用平板细胞克隆形成试验检测各组细胞增殖能力;利用免疫共沉淀技术检测ΔASPP2对ASPP2与P53结合能力的影响;利用免疫印记检测各组细胞自噬及凋亡相关蛋白表达水平。结果1.相对于癌旁正常组织,ASPP2 m RNA在结肠癌组织中表达显著降低(肿瘤2.27±1.66 VS癌旁3.63±1.73,P0.05),ΔASPP2 m RNA在肿瘤组织中表达增加(肿瘤0.54±0.26 VS癌旁0.40±0.23,P0.05),P53 m RNA在癌及癌旁组织中的表达没有明显差异(肿瘤5.31±1.14,癌旁5.55±1.07,P0.05);2.ΔASPP2能够拮抗ASPP2与P53的结合,从而抑制其促细胞凋亡功能;3.ΔASPP2能够增加细胞存活率并提高细胞增殖能力;4.与P53处理组(自噬5.43%±0.21%,凋亡33.67%±0.76%)相比,ΔASPP2+P53处理组自噬水平增加(14.77%±0.25%,P0.05),凋亡水平下降(21.33%±0.94%,P0.05);与ASPP2+P53处理组(自噬3.37%±0.15%,凋亡50.61%±1.25%)相比,ΔASPP2+ASPP2+P53处理组自噬水平增加(12.33%±0.26%,P0.05),凋亡水平下降(35.18%±1.12%,P0.05)。结论1.与癌旁正常组织相比,ASPP2 m RNA在结直肠癌组织中表达降低,ΔASPP2 m RNA在结直肠癌组织中表达增高,P53 m RNA表达在两者间无明显差异;2.ΔASPP2能够抑制ASPP2与P53的结合能力;3.ΔASPP2能够拮抗ASPP2及P53的抑制细胞自噬功能;4.ΔASPP2能够拮抗ASPP2及P53的促进细胞凋亡功能;5.ΔASPP2可通过促进细胞自噬抑制细胞凋亡。
【关键词】：P53 P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) ASPP亚型(ΔASPP2) 细胞自噬 细胞凋亡 结肠癌
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 英文缩略词表11-13
• 前言13-17
• 材料与方法17-23
• 结果23-32
• 讨论32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 文献综述39-47
• 参考文献43-47
• 攻读硕士期间参与发表文章情况47-48
• 致谢48

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本文编号：469642