TRA2β与胶质瘤的相关性研究
本文关键词：TRA2β与胶质瘤的相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:研究TRA2β在胶质瘤组织中的表达及其在胶质瘤细胞中对肿瘤生物学特征的影响,旨在寻找与胶质瘤发生、发展相关的新的靶基因。方法:(1)运用Western blot方法,检测在人正常脑组织和胶质瘤组织中TRA2β的表达情况;收集80例胶质瘤手术标本,应用免疫组化方法检测TRA2β和增殖指标Ki-67的表达情况,将两者的表达情况与患者的临床病理因素进行相关性分析。通过Kaplan-Meier法分析TRA2β的表达与胶质瘤患者的生存率之间的相关性;(2)选取高表达TRA2β的胶质瘤细胞株作为研究对象,建立血清饥饿释放模型,处理后运用Western blot方法检测TRA2β蛋白表达水平变化,探究其在胶质瘤细胞增殖中的潜在作用。(3)通过小干扰的方式下调细胞中TRA2β的内源性表达,然后采用细胞流式分析、CCK-8、Transwell等方法检测TRA2β表达的下调对细胞周期、增殖以及迁移的影响。结果:(1)Western blot及免疫组化均显示,TRA2β在胶质瘤组织中的表达明显增高。统计学分析提示TRA2β的表达强度与胶质瘤组织学分级之间的关系有统计学意义(P0.05),相关性分析表明TRA2β与Ki-67表达呈正相关(r=0.440;P0.045);Kaplan-Meier分析显示TRA2β在胶质瘤中的高表达与患者低生存率的显著相关(P0.01);(2)通过血清饥饿的方式使胶质瘤细胞生长周期停滞,血清释放后刺激细胞增殖;Western blot结果显示TRA2βPCNA等蛋白随着细胞周期的进展表达增加;si RNA分析显示,TRA2β表达的下调可引起PCNA、cyclin A表达降低,同时使细胞周期的停滞、增殖水平及迁移能力的下降。结论:(1)TRA2β在胶质瘤组织中表达增加;TRA2β的高表达增加肿瘤分级正相关并提示不良预后;说明TRA2β可能与胶质瘤的发生发展相关。(2)TRA2β的表达在血清饥饿的胶质瘤细胞中逐渐增加,提示其与细胞的增殖过程相关。si RNA干扰TRA2β的内源性表达后,可能通过使胶质瘤细胞周期停滞来影响其增殖;TRA2β表达下调后,细胞增值、迁移能力下降。
【关键词】：胶质瘤 TRA2β 增殖 迁移 预后
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-10
- 第一章 前言10-14
- 论文的主要研究内容13-14
- 第二章 材料和方法14-29
- 2.1 材料14-19
- 2.1.1 组织标本14
- 2.1.2 细胞14
- 2.1.3 试剂14-19
- 2.1.4 实验仪器19
- 2.2 方法19-29
- 2.2.1 Western blot操作流程19-21
- 2.2.2 病理切片的免疫组化21-24
- 2.2.3 细胞株的培养24
- 2.2.4 TRA2β基因的si-RNA质粒24-25
- 2.2.5 利用脂质体Lipofectamine 2000 介导基因转染25
- 2.2.6 RT-PCR25-27
- 2.2.7 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期的分布27-28
- 2.2.8 CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖活性28
- 2.2.9 Transwell迁移实验28-29
- 第三章 结果29-39
- 3.1 TRA2β在胶质瘤组织中的表达29-31
- 3.1.1 Western blot检测TRA2β在胶质瘤中的表达情况29
- 3.1.2 免疫组化技术检测TRA2β和Ki-67 在胶质瘤石蜡切片组织中的表达29-30
- 3.1.3 TRA2β和Ki-67 在胶质瘤组织中表达的相关性分析30-31
- 3.2 TRA2β与临床病理学参数的关系31-32
- 3.3 TRA2β的表达对胶质瘤患者生存率的影响32
- 3.4 TRA2β在胶质瘤细胞中的表达32-33
- 3.5 TRA2β对胶质瘤细胞增值的影响33-37
- 3.5.0 血清饥饿释放对U87 细胞株的细胞周期影响33-34
- 3.5.1 TRA2β在U87 细胞增殖过程中表达的变化34
- 3.5.2 TRA2β表达下调对胶质瘤细胞周期及其相关蛋白的影响34-36
- 3.5.3 CCK-8 法检测TRA2β与胶质瘤细胞株增殖情况36-37
- 3.6 TRA2β对胶质瘤细胞迁移的影响37-39
- 第四章 讨论39-43
- 第五章 结论43-44
- 参考文献44-49
- 英文缩写词表49-51
- 综述51-63
- 综述参考文献59-63
- 攻读硕士期间公开发表的论文63-64
- 致谢64-65
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