沉默DNA甲基转移酶上调NDRG1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-07-05 06:25

  本文关键词：沉默DNA甲基转移酶上调NDRG1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

  更多相关文章： NDRG1 DNA甲基化 DNA甲基转移酶 RNA干扰 前列腺癌

【摘要】：目的通过沉默DNA甲基转移酶上调NDRG1基因,探讨其对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响。方法1.收集天津市泌尿外科研究所保存的12例行根治性前列腺切除术患者的前列腺癌组织及12例行根治性膀胱切除术或经尿道前列腺电切术患者的良性前列腺增生组织标本,通过免疫组织化学染色及RT-q PCR方法检测组织中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达情况,并对结果进行统计学分析。2.体外培养前列腺癌细胞系DU145、PC-3及人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1,通过RT-q PCR、Western blot方法检测细胞系中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达情况,并对结果进行统计学分析。3.参照相关资料设计DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA及其阴性对照序列(negative control,NC),分别转染DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA、DNMT1-si RNA+DNMT3b-si RNA至DU145细胞,同时设置阴性对照(NC control)及空白对照(Control)。通过RT-q PCR、Western blot方法检测细胞中DNMT1、DNMT3b和NDRG1基因表达改变。通过CCK8检测细胞增殖情况,Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,并对结果进行统计学分析。筛选出NDRG1表达提升及细胞生物学行为改变最显著组DU145细胞进行下一步实验。4.参照相关资料设计NDRG1-si RNA及其阴性对照序列,将NDRG1-si RNA转染至上述NDRG1表达提升最显著组的DU145细胞,同时设置阴性对照及空白对照。通过RT-q PCR、Western blot方法检测细胞中NDRG1基因表达改变,并进行细胞增殖能力、细胞凋亡情况、细胞迁移及侵袭能力检测,最后对结果进行统计学分析。结果1.免疫组化及RT-q PCR结果显示,DNMT1、DNMT3b在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织(P0.05),NDRG1在前列腺增生组织中的表达高于前列腺癌组织(P0.05)。2.通过RT-q PCR及Western blot检测发现,DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3细胞系中的表达高于RWPE-1细胞系(P0.05),且DNMT1、DNMT3b在DU145细胞系中的表达高于PC-3细胞系(P0.05);NDRG1在RWPE-1细胞系中的表达高于DU145、PC-3细胞系(P0.05)。3.将DU145细胞分为5组进行转染后,通过RT-q PCR、Western blot、CCK8细胞增殖实验、Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验等检测发现,DNMT1-si RNA、DNMT3b-si RNA可显著抑制DNMT1、DNMT3b的m RNA和蛋白表达(P0.05),显著提升NDRG1的m RNA和蛋白表达(P0.05),显著抑制细胞增殖(P0.05),促进细胞凋亡(P0.05),减弱细胞的迁移和侵袭能力(P0.05)。其中DNMT1-si RNA组效果最显著,共转染未见显著协同效应(P0.05)。4.转染DNMT1-si RNA至DU145细胞24h后,将这些细胞分为3组再次进行转染。通过RT-q PCR、Western blot、CCK8细胞增殖实验、Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验等检测发现,NDRG1-si RNA可显著抑制NDRG1的m RNA和蛋白表达(P0.05),显著促进细胞增殖(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),增强细胞的迁移和侵袭能力(P0.05)。结论1.DNMT1、DNMT3b在前列腺癌细胞中高表达,在正常前列腺细胞中低表达;NDRG1在前列腺癌细胞中低表达,在正常前列腺细胞中高表达。2.NDRG1在前列腺癌细胞中发挥抑癌基因的作用,可以抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭。3.DNMT1、DNMT3b可以通过增加NDRG1的DNA甲基化修饰降低其在前列腺癌细胞中的表达,进而促进前列腺癌细胞的增殖和侵袭,其中DNMT1发挥主要作用。4.抑制DNMT1、DNMT3b可以部分恢复NDRG1在前列腺癌细胞中的表达,进而抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭。
【关键词】：NDRG1 DNA甲基化 DNA甲基转移酶 RNA干扰 前列腺癌
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-19
• 研究现状、成果12-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、检测正常前列腺及前列腺癌中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表达情况19-41
• 1.1 材料和方法19-34
• 1.1.1 实验材料19-25
• 1.1.2 实验方法25-33
• 1.1.3 统计学处理33-34
• 1.2 结果34-37
• 1.2.1 免疫组化检测前列腺增生组织和前列腺癌组织中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表达34-35
• 1.2.2 RT-qPCR检测前列腺增生组织和前列腺癌组织中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 m RNA的表达35-36
• 1.2.3 Western blot检测细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表达36
• 1.2.4 RT-qPCR检测细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 mRNA的表达36-37
• 1.3 讨论37-39
• 1.4 小结39-41
• 二、转染siRNA后，，检测DU145细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1的表达情况及细胞生物学行为的改变41-58
• 2.1 材料和方法41-48
• 2.1.1 实验材料41-44
• 2.1.2 实验方法44-48
• 2.1.3 统计学处理48
• 2.2 结果48-55
• 2.2.1 Western blot检测细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1蛋白的表达48-49
• 2.2.2 RT-qPCR检测细胞中DNMT1、DNMT3b、NDRG1 mRNA的表达49-51
• 2.2.3 CCK8检测细胞增殖情况51
• 2.2.4 Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡情况51-52
• 2.2.5 划痕实验检测细胞迁移情况52-54
• 2.2.6 Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况54-55
• 2.3 讨论55-57
• 2.4 小结57-58
• 三、沉默NDRG1后，检测DU145细胞生物学行为的改变58-67
• 3.1 材料和方法58-60
• 3.1.1 实验材料58
• 3.1.2 实验方法58-60
• 3.1.3 统计学处理60
• 3.2 结果60-65
• 3.2.1 Western blot检测DU145细胞中NDRG1蛋白的表达60-61
• 3.2.2 RT-qPCR检测DU145细胞中NDRG1 mRNA的表达61-62
• 3.2.3 CCK8检测细胞增殖情况62-63
• 3.2.4 Muse细胞状态分析仪检测细胞凋亡情况63
• 3.2.5 划痕实验检测细胞迁移情况63-65
• 3.2.6 Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况65
• 3.3 讨论65-66
• 3.4 小结66-67
• 结论67-68
• 参考文献68-71
• 发表论文和参加科研情况说明71-72
• 综述 DNA异常甲基化与前列腺癌72-87
• 综述参考文献80-87
• 致谢87-89
• 个人简历89

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 佟红艳,林茂芳;DNA甲基转移酶在骨髓增生异常综合征与白血病细胞中的表达[J];中华血液学杂志;2003年06期

2 吴庆;周志俊;大迫诚一郎;;环境污染物对着床前小鼠胚胎的DNA甲基转移酶活性的影响[J];卫生研究;2006年01期

3 李旭;林方才;周红;郑建红;刘丽娟;李秋阳;;DNA甲基转移酶 凋亡抑制蛋白在肺癌组织中的表达及意义[J];山西医药杂志;2011年10期

4 王亮,吴e

本文编号：520836