外源性PDCD4转染食管癌Eca109细胞系对其生长和凋亡的影响

发布时间：2017-07-07 05:14

  本文关键词：外源性PDCD4转染食管癌Eca109细胞系对其生长和凋亡的影响

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【摘要】：目的将外源性PDCD4导入食管癌Eca109细胞系,通过与空载体转染细胞及未转染细胞作对照,研究PDCD4对食管癌细胞的形态、生长增殖以及凋亡的影响,为实验研究及临床基因治疗提供实验依据。方法1.用空载体或PDCD4重组表达载体转染食管癌Eca109细胞系,并用荧光定量PCR和Western blot方法检测转染后PDCD4在食管癌细胞系中的表达。2.通过显微镜观察PDCD4转染前后食管癌Eca109细胞系的生长分化及形态学变化。3.转染48小时后,通过显微镜对三组食管癌Eca109细胞进行计数对照,分析PDCD4转染对细胞生长增殖的影响。4.通过流式细胞术分析比较三组食管癌Eca109细胞的凋亡情况。结果1. PDCD4基因成功转染食管癌Eca109细胞并稳定表达。荧光显微镜下,转染PDCD4重组表达载体组及转染空载体组的食管癌Eca109细胞可看到绿色荧光,而未转染组的食管癌Eca109细胞无荧光。通过荧光定量PCR及Western blot方法检测到PDCD4mRNA及PDCD4蛋白在转染PDCD4重组表达载体的细胞中高表达,说明PDCD4基因成功转染食管癌Eca109细胞并稳定表达。2. PDCD4能够使食管癌Eca109细胞形态发生改变。未转染组及转染空载体组的食管癌Eca109细胞生长均良好,形态均正常,而转染PDCD4重组表达载体组的食管癌Eca109细胞,数量和形态均发生明显的变化,细胞变圆,萎缩,甚至有部分细胞已经死亡脱落。3. PDCD4的表达对食管癌Eca109细胞的生长及细胞数目有明显的影响。PDCD4表达载体转染的Eca109细胞计数为(5.02±0.29)×105,明显少于未转染组Eca109细胞计数(7.67±0.44)×105,差异有显著性(P0.05)；明显少于转染空载体组细胞计数(6.81±0.33)×105,差异有显著性(P0.05)。而未转染组细胞计数与空载体转染组细胞计数差异无统计学意义(P0.05)。4. PDCD4的表达可以促进食管癌Eca1 09细胞的凋亡。转染PDCD4重组表达载体组的Eca109细胞凋亡率(38.07-%-1.08%)明显高于未转染组Eca109细胞的凋亡率(19.57%±2.6%),差异有统计学意义(P0.05)；另外,转染PDCD4重组表达载体组的Eca109细胞凋亡率明显高于转染空载体组的Eca109细胞凋亡率(26.9%±0.61%),差异有统计学意义(P0.05)。结论1. PDCD4在食管癌Eca109细胞中成功转染并稳定表达。2. PDCD4转染食管癌Eca109细胞并稳定表达后,细胞的生长和增殖受到抑制,表明PDCD4可以抑制食管癌Eca109细胞的生长。3. PDCD4在食管癌Eca109细胞稳定表达后可以促进细胞的凋亡,表明促进细胞凋亡可能为PDCD4的一个抑癌机制。
【关键词】：PDCD4 食管癌 PCR Western blot
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符号说明12-13
• 第一章 前言13-15
• 1 研究背景13-14
• 2 研究目的和意义14-15
• 第二章 文献综述15-23
• 1 食管癌15-19
• 1.1 食管癌一般情况概述15
• 1.2 食管癌发病的主要危险因素15-17
• 1.3 食管癌的治疗概述17-19
• 2 程序性细胞死亡因子419-23
• 2.1 PDCD4的发现19-20
• 2.2 PDCD4在肿瘤中的表达和调节机制20-21
• 2.3 PDCD4的抑癌作用21-23
• 第三章 实验材料与方法23-36
• 1 细胞23
• 2 实验试剂及仪器23-25
• 2.1 转染及培养细胞所用的主要实验试剂23
• 2.2 蛋白提取及Western blot所用试剂23-24
• 2.3 PCR实验试剂24
• 2.4 流式细胞术实验试剂24
• 2.5 实验仪器24-25
• 3 实验步骤25-36
• 3.1 细胞处理25-26
• 3.2 脂质体介导PDCD4真核表达载体转染26-27
• 3.3 Western blot实验方法27-31
• 3.4 PCR试验方法31-34
• 3.5 流式细胞术实验方法34-35
• 3.6 统计方法35-36
• 第四章 结果36-39
• 1 外源性PDCD4基因在食管癌Eca109细胞的表达36-37
• 1.1 外源性PDCD4蛋白在细胞系内的表达36-37
• 1.2 外源性PDCD4mRNA在细胞系内的表达37
• 2 PDCD4表达对食管癌细胞形态产生的影响37-38
• 3 PDCD4表达对食管癌细胞生长产生的影响38
• 4 PDCD4表达对食管癌Eca109细胞凋亡产生的影响38-39
• 第五章 讨论39-42
• 第六章 结论42-44
• 1 小结42
• 2 创新性和不足之处42
• 3 研究感悟42-44
• 参考文献44-50
• 致谢50-51
• 攻读学位期间发表的论文目录51-52
• 学位论文评阅及答辩情况表52

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