淫羊藿苷对胃癌SGC-7901细胞内CaSR及Survivin、Runx3基因表达的影响

发布时间：2017-07-19 06:14

  本文关键词：淫羊藿苷对胃癌SGC-7901细胞内CaSR及Survivin、Runx3基因表达的影响

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【摘要】：目的:通过观察淫羊藿苷(ICA)联合钙敏感受体(CaSR)活性改变对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,及其对细胞内CaSR及Survivin、Runx3基因表达的影响,探讨ICA抗肿瘤的相关机制,为临床应用ICA治疗胃癌提供实验依据,促进胃癌的有效治疗,并促进中药有效成分在抗肿瘤治疗方面更好地发挥优势。方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞1.ICA及ICA联合CaSR活性改变对SGC-7901细胞增殖的影响:采用噻唑蓝比色法(MTT)测定经递增剂量ICA(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)、ICA联合CaSR激动剂(Calindol)和抑制剂(Calhex231),作用24 h、48 h及72 h后的SGC-7901细胞增殖抑制率。2.ICA联合Calindol对SGC-7901细胞凋亡的影响:Hoechst染色法检测ICA及ICA联合Calindol对SGC-7901细胞作用48 h后的细胞凋亡情况。3.ICA联合CaSR活性改变对SGC-7901细胞内CaSR、Survivin、Runx3基因蛋白和mRNA表达的影响:ICA联合Calindol、Calhex231对SGC-7901细胞作用48 h后,Western blot技术检测细胞内CaSR、Survivin及Runx3基因蛋白的表达情况;RT-PCR技术检测细胞内CaSR、Survivin及Runx3基因mRNA的表达情况。4.统计学方法:全部实验数据均采用SPSS17.0软件包进行统计学分析,计量资料服从正态分布用均值(x±S)表达,多组间比较采用方差分析,两组间用SNK做两两比较;不服从正态分布采用中位数和四分位间距表达,组间比较采用秩和检验。计数资料用率表达,组间比较采用卡方检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果:1.MTT结果显示不同浓度的ICA分别作用于SGC-7901细胞24 h、48 h及72 h后,均有明显的抑制增殖的作用,与对照组比较有统计学差异(P0.05),随着药物浓度的增加及作用时间的延长,其作用效果越强,呈时间、剂量依赖性。2.不论作用24 h,48 h还是72 h,ICA联合Calindol对SGC-7901细胞的抑制增殖作用明显高于相同浓度的ICA或Calindol单独作用于SGC-7901细胞的效果,与对照组比较有统计学差异(P0.05),且呈时间依赖性。3.经Hoechst33342染色后,ICA联合Calindol对SGC-7901细胞的诱导凋亡的作用明显高于相同浓度的ICA或Calindol单独作用于SGC-7901细胞的效果。4.ICA和Calindol均能促进SGC-7901细胞内CaSR、Runx3蛋白和mRNA表达上调,Survivin蛋白和mRNA表达下调;二者联合后促进CaSR、Runx3表达上调和Survivin表达下调的作用效果明显高于单独作用,与对照组相比有统计学差异(P0.05)。结论:1.ICA能够明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性。2.ICA与Calindol联合作用于SGC-7901细胞,其抑制增殖的效应明显大于二者单独作用于SGC-7901细胞,且呈时间依赖性。3.ICA能够明显诱导SGC-7901细胞的凋亡,且ICA与Calindol联合作用于SGC-7901细胞后,诱导凋亡的作用明显大于二者单独作用的效果。4.ICA和Calindol对SGC-7901细胞的抑制增殖并诱导凋亡的作用与其上调Runx3的表达并下调Survivin的表达有关。
【关键词】：淫羊藿苷 胃癌SGC-7901细胞 CaSR Runx3 Survivin
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符号说明10-11
• 前言11-18
• 实验研究18-49
• 1 材料18-21
• 1.1 细胞18
• 1.2 实验药品及试剂18-19
• 1.3 实验设备及仪器19-20
• 1.4 主要试剂和药品的配制20-21
• 2 实验方法21-34
• 2.1 技术路线21-22
• 2.2 细胞培养22-23
• 2.3 MTT法检测ICA对SGC-7901细胞增殖作用的影响23
• 2.4 MTT法检测有效浓度ICA联合Calindol对SGC-7901细胞增殖作用的影响23-24
• 2.5 Hoechst染色检测细胞凋亡24-25
• 2.6 Western blot技术检测细胞内CaSR、Survivin及Runx3基因的蛋白表达情况25-30
• 2.7 RT-PCR技术检测细胞内CaSR、Survivin及Runx3基因的mRNA表达情况30-34
• 3 实验结果34-45
• 3.1 ICA联合Calindol对SGC-7901细胞增殖的影响35-37
• 3.2 ICA联合Calindol对SGC-7901细胞凋亡的影响37-39
• 3.3 Western blot检测CaSR、Survivin、Runx3蛋白表达39-42
• 3.4 RT-PCR检测CaSR、Survivin、Runx3基因mRNA的表达42-45
• 4 分析与讨论45-49
• 4.1 ICA联合CaSR活性改变对SGC-7901细胞增殖的影响46
• 4.2 ICA联合Calindol对SGC-7901细胞凋亡的影响46-47
• 4.3 ICA联合CaSR活性改变对SGC-7901细胞内CaSR、Survivin、Runx3蛋白和mRNA表达的影响47
• 4.4 ICA抗肿瘤的中医药理论基础47-49
• 结语49-51
• 参考文献51-56
• 文献综述56-61
• 参考文献59-61
• 致谢61-62
• 在学期间主要研究成果62

【参考文献】

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本文编号：561524