过表达miR-101调节脑胶质瘤增殖、迁移的机制研究

发布时间：2017-07-25 16:30

  本文关键词：过表达miR-101调节脑胶质瘤增殖、迁移的机制研究

  更多相关文章： 胶质瘤 miR-101 SOX9 增殖 侵袭

【摘要】：胶质瘤为颅内最常见的恶性肿瘤,其发病率约占颅内肿瘤的46%左右,根据世界卫生组织(WHO)可分为I-IV级,其中IV级中预后最差的病理分型的是胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)。患者自然病程多在半年以内。且经过手术、放化疗以及免疫靶向治疗,患者中位生存期没有明显延长。MicroRNA(miRNA)分子作为一种可以通过靶向作用于多个靶基因而又同时被多个基因作为共同的靶标的分子,普遍存在于动植物体内的内源性非编码的小分子RNA,其在生命活动中起到了多种作用。MiRNA通过特异的互补识别位点在转录后一直靶基因的翻译,或者降解调节下游基因的表达水平。胶质瘤作为最致命的颅内恶性肿瘤之一,其中也存在microRNA表达谱异常。以往研究表明多种microRNA亚型与已知的胶质瘤主要的相关信号通路相关,即microRNA的异常表达参与了胶质瘤的生长和侵袭。同时,外源性的把microRNA分子人为导入胶质瘤细胞,可以有效纠正相关microRNA亚型表达下调的相关表型,为利用microRNA进行外源性导入治疗脑胶质提供了重要依据。Mi R-101在以往文献的研究中表明:miR-101低表达与胶质瘤的发生、发展呈正相关关系,并且低表达mi R-101的肝癌患者的生存率较低。有报道表明,miR-101能够直接抑制EZH2和c-Myc的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖于侵袭。在临床患者,胶质瘤的术后差和复发率高于肿瘤其本身的高侵袭性有关,miR-101在以往的研究中参与影响胶质瘤的侵袭和和增殖性,但具体的下游作用分子到目前还没有完全弄清楚,所以在胶质瘤中研究miR-101与其肿瘤的高侵袭性的关系的具体机制变得十分重要。本研究中,我们通过文献回顾和相关软件的生物信息学分析,我们将研究放在miR-101与胶质瘤细胞的增殖、侵袭肝癌细胞转移的关系上。首先,为研究miR-101与胶质瘤细胞增殖、侵袭的关系,我们通过qRT-PCR检测临床肿瘤和正常脑组织标本中miR-101的表达水平;同时利用过表达miR-101的慢病毒感染U87、U251胶质瘤细胞系,构建过表达miR-101的稳转细胞系。通过MTT实验、划痕实验、Transwell实验、裸鼠成瘤实验分析了miR-101对于胶质瘤的体内、外的影响;其次,为明确miR-101抑制胶质瘤增殖、迁移的分子机制,运用分子克隆技术检测结合文献和靶基因预测软件分析的靶基因的3’UTR区域,并将其连接到pGL3-Control的报告载体上。同时利用荧光素酶报告基因实验、Western blot及qRT-PCR等多种方法证实SOX9在胶质瘤中是miR-101调控的直接靶基因进行验证。同时应用慢病毒技术构建了干涉转录因子SOX9表达的稳转细胞系。应用通过MTT实验、划痕实验、Transwell实验等分析SOX9对于胶质瘤细胞表型影响;通过结果分析发现,qRT-PCR分析结果证明胶质瘤标本中的miR-101的表达水平较正常脑组织明显降低;慢病毒感染U87、U251胶质瘤细胞后miR-101的表达水平明显升高;MTT实验显示过表达miR-101促进胶质瘤细胞增殖、迁移的能力;裸鼠皮下成瘤实验证明过表达miR-101可以有效抑制裸鼠皮下成瘤的能力;荧光素酶报告基因实验、Western blot及qRT-PCR实验证明SOX9确实为miR-101的下游调控的直接靶基因;利用慢病毒技术构建干涉转录因子SOX9的稳转细胞系,Western blot及qRT-PCR实验证明了干涉SOX9可以有效降低胶质瘤细胞的增殖和侵袭。综上所述,我们认为在胶质瘤中存在如下的调控关系,即miR-10可以直接作用于SOX9进而抑制胶质瘤的增殖、迁移的能力。
【关键词】：胶质瘤 miR-101 SOX9 增殖 侵袭
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-22
• 实验一 miR-101在胶质瘤细胞系和组织中的表达22-28
• 1 实验材料22-23
• 2 实验方法23-25
• 3 实验结果25-27
• 4 讨论27-28
• 实验二 miR-101抑制胶质瘤细胞中的恶性表型28-34
• 1 实验材料28-29
• 2 实验方法29-31
• 3 实验结果31-33
• 4 讨论33-34
• 实验三 过表达miR-101对于裸鼠皮下成瘤的影响34-38
• 1 实验材料34-35
• 2 实验方法35-37
• 3 实验结果37
• 4 讨论37-38
• 实验四 miR-101靶向调节转录因子SOX938-48
• 1 实验材料38-39
• 2 实验方法39-46
• 3 实验结果46-47
• 4 讨论47-48
• 实验五 SOX9在胶质瘤细胞中的生物学功能48-55
• 1 实验材料48-49
• 2 实验方法49-50
• 3 实验结果50-53
• 4 讨论53-55
• 小结55-57
• 参考文献57-70
• 个人简历及研究成果70-71
• 致谢71-72

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本文编号：572239