DOX可诱导的PENK基因在293T细胞中的表达

发布时间：2017-07-29 09:00

  本文关键词：DOX可诱导的PENK基因在293T细胞中的表达

  更多相关文章： 慢病毒 293T细胞 可诱导 前脑啡肽

【摘要】：目的:以前期实验的载体PMT155(p LVX-TRE3G-MCS-PGK-3Gtransactivator-EGFP)构建含有DOX诱导基因PENK表达的慢病毒载体PSB2034(p LVX-TRE3G-PENK-PGK-3Gtransactivator-EGFP,含开关调控和靶基因),使其感染293T细胞,获得能在DOX存在的情况下稳定表达脑啡肽的293T细胞,后续的研究可以以此作依据,临床疼痛管理也可以此扩宽思路,寻求新疗法。方法:1.含有PENK基因的可调控载体的构建在GENE BANK上查找目的基因,确定编码区和非编码区,由吉凯基因设计引物用于钓取PENK基因和鉴定转化子。PCR反应体系进行扩增目的基因,之后使用琼胶试剂盒进行目的基因片段切割、回收。把回收的目的基因同源重组入表达载体构建出载体PSB2034,进行转化,取转化子菌落进行PCR鉴定和基因测序。2.293T细胞的包装复融并培养293T细胞使其细胞融合约80~90%。实验组和对照组加入质粒(实验组p SB2034对照组p MT155)d R8.9包装质粒和VSVG包装质粒进行慢病毒的包装,而后包装293T,并用DOX诱导,QPCR检测出PENK过表达,WB检出条带反应。结果:对产物PSB2034进行测序与目的基因比证明无误;感染过程中,用荧光显微镜观察细胞,发现多于95%的细胞都带有荧光,滴度检测证明转染成功,DOX诱导后可检测出PENK基因过表达。结论:本实验已经构建出DOX诱导后能稳定表达脑啡肽的293T细胞。
【关键词】：慢病毒 293T细胞 可诱导 前脑啡肽
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614;R730.5
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-22
• 1.1 实验材料11-14
• 1.2 实验方法14-22
• 2 结果22-30
• 2.1 PCR扩增PENK结果22-23
• 2.2 阳性克隆序列检测结果分析23-25
• 2.3 293T细胞的感染照片25
• 2.4 滴度检测结果及照片25-28
• 2.5 DOX诱导 293T细胞后PENK表达情况检测28-30
• 3 讨论30-31
• 4 结论31-32
• 参考文献32-35
• 综述35-43
• 参考文献40-43
• 致谢43-44
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果44-45
• 个人简历45

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本文编号：588328