多个候选基因启动子区域DNA甲基化与结直肠癌的相关性研究

发布时间：2017-08-01 02:00

  本文关键词：多个候选基因启动子区域DNA甲基化与结直肠癌的相关性研究

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【摘要】：目的:结直肠癌的演变是一个多步骤、涉及遗传和表观遗传改变的复杂过程。其中,DNA甲基化是其发生发展中重要的表观遗传调控机制。PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD启动子甲基化可调控其基因表达水平,但其在结直肠癌发生发展中的调控机制尚不明确。因此,本研究探讨PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因启动子甲基化与结直肠癌发生发展的相关性。方法:1、收集结直肠癌组织及正常对照组织各42例,整理临床病理资料。2、提取基因组DNA,并测定DNA浓度及质量。3、将基因组DNA进行亚硫酸盐修饰。4、修饰后的基因组DNA予以甲基化特异性PCR扩增,并将MSP产物进行琼脂糖凝胶电泳。5、随机抽取3份MSP扩增产物进行DNA甲基化测序。6、采用SPSS18.0统计软件处理数据,分析与结直肠癌发生、转移的关联性,采用χ2检验,P0.05有统计学意义。结果:通过甲基化特异性PCR和琼脂糖凝胶电泳,分析得出结直肠癌组织PCDH-γ-A12、SLC19A1基因启动子DNA甲基化程度高于正常组织,有统计学意义(83.33%vs 57.14%,p=0.009;78.57%vs 45.24%,p=0.002);CREB、CYLD基因启动子DNA甲基化程度在结直肠癌组织与正常组织差异无统计学意义(26.19%vs 11.90%,p=0.095;14.29%vs 11.90%,p=0.746)。结直肠癌淋巴结转移组织PCDH-γ-A12、SLC19A1基因启动子DNA甲基化程度高于淋巴结未转移组织,有统计学意义(100.00%vs 66.67%,p=0.013;95.24%vs 61.90%,p=0.024);CREB、CYLD基因启动子DNA甲基化程度在结直肠癌淋巴结转移组织与淋巴结未转移组织差异无统计学意义(33.33%vs 19.05%,p=0.292;19.05%vs 9.52%,p=0.659)。通过DNA甲基化测序得出结直肠癌组织PCDH-γ-A12、SLC19A1的甲基化特异性PCR扩增产物胞嘧啶保持不变,未转换成胸腺嘧啶,结直肠癌组织PCDH-γ-A12,SLC19A1基因启动子区高甲基化;结直肠癌组织CREB、CYLD的甲基化特异性PCR扩增产物胞嘧啶转变成胸腺嘧啶,结直肠癌组织CREB、CYLD基因启动子区未甲基化。并且我们研究得出PCDH-γ-A12,SLC19A1,CREB和CYLD基因甲基化水平与结直肠癌临床特征均无显著相关性。结论:PCDH-γ-A12、SLC19A1启动子高甲基化可促进结直肠癌的发生和转移,而CREB、CYLD启动子甲基化程度与结直肠癌则不具有显著相关性。这些发现可能为早期发现及治疗结直肠癌提供新线索,并且PCDH-γ-A12、SLC19A1启动子甲基化状态可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物,以此为靶点的药物可成为结直肠癌治疗的一种新手段。
【关键词】：结直肠癌 甲基化特异性PCR PCDH-γ-A12 SLC19A1
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 实验目的12-13
• 2 研究对象及临床资料的收集13-14
• 3 材料与方法14-22
• 3.1 实验材料14-15
• 3.1.1 结直肠癌组织、正常对照组织14
• 3.1.2 主要实验仪器14-15
• 3.1.3 主要实验试剂15
• 3.2 实验方法15-21
• 3.2.1 收集样本、整理信息15-17
• 3.2.2 提取基因组DNA17
• 3.2.3 测定DNA浓度及质量17-18
• 3.2.4 亚硫酸盐修饰18-19
• 3.2.5 甲基化特异性PCR19-20
• 3.2.6 电泳20
• 3.2.7 甲基化测序20-21
• 3.3 统计分析21-22
• 4 实验结果22-31
• 4.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化检测22-25
• 4.1.1 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化电泳23-24
• 4.1.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化测序24-25
• 4.2 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化与临床特征的关系25-31
• 4.2.1 结直肠癌和正常组织PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB和CYLD基因甲基化的比较25-26
• 4.2.2 结直肠癌淋巴转移和淋巴未转移组织 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化的比较26-27
• 4.2.3 结直肠癌组织 PCDH-γ-A12, SLC19A1, CREB 和 CYLD 基因甲基化状态与其他临床特征的关系27-31
• 5 讨论31-33
• 6 结论33-34
• 参考文献34-38
• 附录A 中英文对照表38-39
• 附录B 文献综述39-52
• 参考文献48-52
• 在学研究成果52-54
• 致谢54

【共引文献】

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本文编号：602015