嵌合体抗原受体修饰的T细胞对血液恶性肿瘤细胞的杀伤

发布时间：2017-08-01 10:19

  本文关键词：嵌合体抗原受体修饰的T细胞对血液恶性肿瘤细胞的杀伤

  更多相关文章： 嵌合抗原受体(CAR) T细胞 CD19/CD138 套式淋巴瘤 骨髓瘤

【摘要】：为了分别探讨靶向CD19分子和CD138分子的嵌合抗原受体修饰的T细胞(CD19/CD138-CAR-T)与未被基因修饰的T细胞相比,是否可以提高对CD19+的套式淋巴瘤细胞和CD138+骨髓瘤的杀伤率。我们通过基因合成和分子克隆手段构建CD19/CD138-CAR片段,将CD19/CD138-CAR片段分别克隆到慢病毒载体上,然后用慢病毒对T细胞进行转染。利用PCR、蛋白免疫印迹术、流式细胞术检测目的蛋白在T细胞上的表达。最后用流式细胞术检测T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。结果发现未被CAR基因修饰的T细胞对CD19阳性的Jeko-1、Rec-1、Maver-1细胞的杀伤效率分别为30%、17%和32%,而CD19-CAR-T细胞对上述3种肿瘤细胞的杀伤效率分别为78%、60%和75%;未被基因修饰的T细胞对CD138阳性的U266和8226细胞的杀伤率分别为10%和38%,而CD138-CAR-T细胞对上述2种肿瘤细胞的杀伤率分别为43%和86%。得出结论为经CD19/CD138嵌合抗原体受体修饰的T细胞可特异性识别CD19/CD138分子,对CD19/CD138阳性的肿瘤细胞的杀伤效率显著高于未被基因修饰的T细胞,显示出CAR-T在免疫治疗中具有巨大潜力。为了得到兼具细胞毒杀伤毒性和在体外长期维持活性的中央记忆T细胞,我们选用Persongen aAPC以及IL-7对CAR-T细胞进行扩增。
【关键词】：嵌合抗原受体(CAR) T细胞 CD19/CD138 套式淋巴瘤 骨髓瘤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.51
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-13
• 材料和方法13-20
• 1 实验材料13-14
• 1.1 细胞系13
• 1.2 主要试剂与材料13
• 1.3 主要仪器与设备13-14
• 1.4 主要抗体14
• 2 实验方法14-20
• 2.1 CD19-CAR-pCDH和CD138-CAR-pCDH载体的构建14
• 2.2 细胞培养14-15
• 2.3 慢病毒包装15-16
• 2.4 分离并制备淋巴细胞单细胞悬液16
• 2.5 T细胞体外激活16-17
• 2.6 慢病毒转染T细胞17
• 2.7 PCR分析17-18
• 2.8 蛋白免疫印迹（Western blotting, WB）分析18-19
• 2.9 流式细胞术（Flow cytometry, FC）分析19
• 2.10 细胞毒性试验19-20
• 结果20-30
• Part 1：CD19嵌合抗原受体修饰的T细胞对CD19+套式淋巴瘤细胞的杀伤20-25
• 1.1 CD19-CAR-PCDH重组质粒构建成功20-21
• 1.2 慢病毒包装、浓缩、滴度测定结果21-22
• 1.3 PCR分析结果表明CD19-CAR片段在T细胞内是正常表达的22
• 1.4 CD19-CAR片段的蛋白表达分析22-23
• 1.5 流式表型分析检测到CD19-CAR片段有蛋白表达在T细胞膜外23-24
• 1.6 CD19-CAR修饰的T细胞对套式淋巴瘤有更高的杀伤率24-25
• Part 2：CD138嵌合抗原受体修饰的T细胞对CD138阳性骨髓瘤细胞的杀伤25-27
• 2.1 CD138-CAR-PCDH重组质粒构建成功25-26
• 2.2 CD138-CAR修饰的T细胞对骨髓瘤细胞有更高的杀伤率26-27
• Part 3：体外对嵌合抗原受体修饰的T细胞进行表型分析27-30
• 3.1 体外用IL-7 和IL-15刺激T细胞得到CD8+CD45RA+CD62L+亚群27-30
• 讨论30-32
• 参考文献32-36
• 综述36-51
• 参考文献43-51
• 致谢51-53

【共引文献】

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本文编号：603752