长链非编码RNA作为胃癌早期诊断标志物的可行性研究

发布时间：2017-08-11 00:08

  本文关键词：长链非编码RNA作为胃癌早期诊断标志物的可行性研究

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【摘要】：目的:先通过在胃癌细胞株、胃癌组织中测定LINC00152的表达量证实它为胃癌相关长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA);再通过测定早期胃癌患者和进展期胃癌患者血浆中LINC00152的水平,探索其作为胃癌早期诊断标志物的可行性;最后通过测定血浆外泌体中LINC00152的水平,探索lncRNA在血浆中稳定存在的主要机制。方法:(1)运用实时定量逆转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR)测定4株人类胃癌细胞株、1株正常人类胃黏膜上皮细胞株、成对胃癌组织及癌旁组织中LINC00152的表达量。(2)运用qRT-PCR测定胃癌患者术前、术后血浆中LINC00152的水平和胃黏膜异性增生患者血浆中LINC00152的水平,并与健康体检者比较;最后用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估血浆LINC00152对胃癌诊断的灵敏度与特异度。(3)在等量血浆中提取外泌体,测定血浆及外泌体中LINC00152水平,并用电镜确定外泌体。结果:(1)LINC00152在胃癌细胞株BGC-823、MGC-803和SGC-7901中表达升高。(2)LINC00152在胃癌组织中表达升高。(3)胃癌患者血浆中LINC00152水平明显高于健康体检者。(4)早期胃癌患者血浆中LINC00152水平也明显高于健康体检者。(5)胃黏膜异性增生患者血浆LINC00152水平与健康体检者相比无明显差异。(6)胃癌患者术后血浆LINC00152水平明显不同于术前。(7)血浆LINC00152作为肿瘤标志物的灵敏度和特异度分别为48.1%和85.2%。(8)外泌体对血浆lncRNA有保护作用。结论:LINC00152作为胃癌相关lncRNA之一有可能成为一种新型胃癌标志物应用于胃癌的早期诊断。LncRNA能在血浆中稳定存在的可能机制是包裹于外泌体中,这一特性有利于临床分析lncRNA型肿瘤标志物。
【关键词】：长链非编码RNA 胃癌 LINC00152 肿瘤标志物 外泌体
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 研究内容和技术路线11-13
• 1.1 研究内容11-12
• 1.1.1 证实LINC00152为胃癌相关lncRNA11
• 1.1.2 证明血浆中存在LINC0015211
• 1.1.3 分析胃癌患者血浆中LINC00152的水平变化11
• 1.1.4 分析胃癌前病变患者的血浆LINC00152的水平11
• 1.1.5 探索血浆中lncRNA稳定存在的机制11-12
• 1.2 技术路线12-13
• 2 方法和材料13-22
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 实验设备13
• 2.1.2 实验试剂13-14
• 2.1.3 主要试剂配制14-15
• 2.1.4 临床标本15
• 2.1.5 细胞株15
• 2.2 实验方法15-22
• 2.2.1 标本取材与处理15
• 2.2.2 细胞培养15-17
• 2.2.3 血浆外泌体提取17
• 2.2.4 总RNA抽提17-18
• 2.2.5 总RNA的定量与完整性检测18-19
• 2.2.6 实时定量逆转录PCR19-20
• 2.2.7 克隆测序20-21
• 2.2.8 电镜观察外泌体21
• 2.2.9 统计学分析21-22
• 3 实验结果22-32
• 3.1 RNA的完整性22
• 3.2 证实LINC00152为胃癌相关lncRNA22-24
• 3.3 血浆lncRNA存在性的检测24-25
• 3.4 胃癌患者的血浆LINC00152水平25-27
• 3.5 血浆LINC00152水平与胃癌患者临床病理因素的关系27-28
• 3.6 ROC曲线分析血浆LINC00152对胃癌诊断的价值28
• 3.7 胃癌前病变患者的血浆LINC00152水平28-29
• 3.8 胃癌患者术后血浆LINC00152的水平变化29-30
• 3.9 血浆LINC00152存在于外泌体中30-32
• 4 讨论32-35
• 5 总结35-36
• 参考文献36-40
• 附录A 缩略词40-41
• 附录B 综述41-54
• 参考文献48-54
• 在学研究成果54-55
• 致谢55

【参考文献】

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1 Emily Zeringer;Mu Li;Tim Barta;Jeoffrey Schageman;Ketil Winther Pedersen;Axl Neurauter;Susan Magdaleno;Robert Setterquist;Alexander V Vlassov;;Methods for the extraction and RNA profiling of exosomes[J];World Journal of Methodology;2013年01期

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本文编号：653304